沖擊波對骨愈合過程中骨痂生成及VEGF和bFGF蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究體外沖擊波對骨折愈合過程中骨痂生成及對血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)蛋白表達(dá)的影響，以探討體外沖擊波促進(jìn)骨折愈合的機(jī)理，為沖擊波治療骨折提供一定的理論和實驗依據(jù)，使體外沖擊波在骨科領(lǐng)域得到更廣泛的應(yīng)用，為此進(jìn)行本課題的研究。 方法：選用健康新西蘭大白兔60只(健康，體重2.75±0.25 kg，普通級，年齡 118天±5天，雌雄不限，山東米歇爾生物公司提供，合格證號 20030011；

2、標(biāo)準(zhǔn)清潔級動物房飼養(yǎng))，隨機(jī)分為6組(3 d、1周、2周、3周、4周和6周)，每組 10只，制造雙側(cè)橈骨骨折模型，左側(cè)為對照側(cè)，右側(cè)為沖擊波治療側(cè)(14 kv，2000 次)。分別于術(shù)后1、2、4和6周進(jìn)行X線攝片，分析軟件評價兩側(cè)骨痂形成量百分比：于術(shù)后3 d、1周、2周、3周、4周和6周進(jìn)行取材行病理檢查，觀察骨愈合情況，軟件分析骨痂生成量百分比。術(shù)后3 d、1周、2周、3周、4.周和6周做免疫組化染色檢測VEGF和bFGF蛋白的表

3、達(dá)水平，軟件分析蛋白表達(dá)陽性指數(shù)。對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，應(yīng)用SAS8.1統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。主效應(yīng)和交互效應(yīng)分析用配對析因分析；單獨效應(yīng)分析中，每個時間點兩組的比較用配對t檢驗，每組各時間點的比較用 one-way ANOVA 及 LSD多重比較方法。 結(jié)果：1、不同時間 X 線檢測兩側(cè)骨痂形成量百分比進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析顯示，在術(shù)后 1、2、4、6周對照側(cè)和治療側(cè)骨痂生成量都隨時間的延長明顯增加，并

4、且沖擊波治療側(cè)骨痂生成量多于對照側(cè) (t=5.525641，P=0.0004：t=4.232911，P=0.0022；t=12.01248，P<0.0001；t=10.14185，P<0.0001)。 2.病理檢查：術(shù)后4周骨痂生成量百分比統(tǒng)計學(xué)分析顯示在骨折區(qū)治療側(cè)纖維組織、纖維軟骨組織和軟骨明顯少于對照側(cè)，差異有顯著性意義(t=18.13，P<0.0001；t=11.10，P<0.0001：t=20.68，P<0.0001)

5、；而皮質(zhì)骨生成量治療側(cè)明顯多于對照側(cè)，差異有顯著性意義(t=-12.53，P<0.0001)。術(shù)后6周骨痂生成量百分比統(tǒng)計學(xué)分析顯示在骨折區(qū)治療側(cè)的纖維軟骨組織、軟骨和編織骨明顯少于對照側(cè)，差異有顯著性意義 (t=11.16，P<0.0001；t=11.90，P<0.0001；t=7.82，P<0.0001)；而皮質(zhì)骨生成量治療側(cè)明顯多于對照側(cè)，差異有顯著性意義(t=-3.51，P=0.0066)。 3、不同時間VEGF蛋白的

6、檢測：實驗顯示在術(shù)后3 d直至6周治療側(cè)和對照側(cè)骨折區(qū)內(nèi)都發(fā)現(xiàn)了VEGF的表達(dá)。細(xì)胞定位研究顯示在骨愈合的不同時期，多種細(xì)胞參與了VEGF的合成，在早期主要見于骨折端骨細(xì)胞的胞漿。以后纖維母細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨內(nèi)成骨區(qū)的軟骨細(xì)胞、新生骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞先后出現(xiàn)陽性反應(yīng)，且分泌 VEGF 的細(xì)胞主要集中在新生血管周圍。免疫組化陽性指數(shù)表明，VEGF 的表達(dá)于術(shù)后3 d開始增強(qiáng)，術(shù)后3周左右達(dá)到高峰，之后開始逐漸下降。免疫組化顯

7、示在早期骨折端骨細(xì)胞染色強(qiáng)度明顯高于對照側(cè)，陽性指數(shù)顯示在術(shù)后 1周、2 周、3周沖擊波治療側(cè)大于對照側(cè)，差異有顯著性意義(t=-5.37，P=0.0005；t=-5.56，P=0.0004；t=-3.70，P=0.0049)。 4、不同時間兩組bFGF蛋白的檢測：實驗表明骨折后3 d，bFGF即在骨折端的成纖維細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿中有較強(qiáng)的表達(dá)，免疫組化陽性指數(shù)顯示，bFGF的表達(dá)于術(shù)后3 d開始增強(qiáng)，術(shù)后2w左右達(dá)到高峰