探討α2巨球蛋白和骨保護(hù)素對(duì)骨-腱愈合的影響.pdf

1、目的:探討α2巨球蛋白(α2-macroglobulin,α2EMG或AMG)和骨保護(hù)素(Osteoprotegerin,OPG)在膝關(guān)節(jié)前交叉韌帶重建術(shù)后骨腱愈合過(guò)程中的促進(jìn)作用。
　　 方法:將36只成年新西蘭白兔隨機(jī)分成ABC三組,手術(shù)均取雙膝關(guān)節(jié)前叉韌帶模型各組間做隨機(jī)對(duì)照。首先采用濃度為0.6％戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉,給藥劑量為2ml/kg,將白兔仰臥位固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,膝關(guān)節(jié)應(yīng)用0.5％利多卡因局部浸潤(rùn)麻醉輔助。然后在實(shí)驗(yàn)

2、兔后腿做一長(zhǎng)約3cm的膝正中切口,鈍性分離皮下組織,通過(guò)膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)支持帶做一個(gè)前內(nèi)側(cè)切口,將髕骨向外側(cè)脫位,充分暴露前交叉韌帶并完全切除。在脛骨上打一條直徑約2.0mm的骨隧道,隧道起于內(nèi)側(cè)副韌帶脛骨前方,止于脛骨髁間棘上前交叉韌帶起始處。在股骨上打一條直徑相同的骨隧道,起于股骨髁間窩中線處,止于外側(cè)副韌帶股骨起點(diǎn)的上方,分離股骨內(nèi)側(cè)肌群找到半腱肌,并于肌腱與肌腹交界處切斷,修整半腱肌肌腱并將其自內(nèi)側(cè)副韌帶的淺層穿經(jīng)脛骨及股骨隧道,于屈

3、膝位拉緊,最終縫合于外側(cè)副韌帶上。對(duì)側(cè)關(guān)節(jié)做相同處理。對(duì)A組膝關(guān)節(jié)股骨及脛骨骨隧道內(nèi)分別注入濃度為50ng/ml的α2巨球蛋白0.15ml,B組膝關(guān)節(jié)股骨及脛骨骨隧道內(nèi)分別注入濃度為50ng/ml骨保護(hù)素0.15ml,C組膝關(guān)節(jié)內(nèi)不注入任何物質(zhì)。沖洗關(guān)節(jié)腔及手術(shù)切口,逐層縫合,敷料包扎。術(shù)后允許試驗(yàn)兔在籠中活動(dòng)。分別于術(shù)后第3、6、12周將各組處死4只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,于膝關(guān)節(jié)上、下4cm斷股骨和脛骨得到完整的膝關(guān)節(jié)標(biāo)本,通過(guò)結(jié)合面病理組織學(xué)切

4、片及力學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察交叉韌帶重建術(shù)后骨.腱之間愈合情況:1.組織學(xué)切片采用He.Masson染色,觀察骨-腱界面的組織學(xué)變化；2.離斷膝關(guān)節(jié)標(biāo)本上除前交叉韌帶外的所有組織聯(lián)結(jié),離斷后將脛骨端及股骨端分別固定于力學(xué)試驗(yàn)儀牽拉臺(tái)兩端,以5.0mm/s的拉力進(jìn)行牽拉試驗(yàn)至肌腱從骨隧道中脫出,并記錄肌腱從骨隧道中脫出時(shí)的加載負(fù)荷,此時(shí)的牽拉力為骨-腱結(jié)合面所能承受的最大牽拉力。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　

5、結(jié)果:一般情況:術(shù)后1只動(dòng)物左側(cè)膝關(guān)節(jié)于術(shù)后第4天出現(xiàn)明顯紅腫,傷口滲出,經(jīng)過(guò)傷口換藥,青霉素20萬(wàn)單位每日皮下注射于術(shù)后第10天,傷口情況好轉(zhuǎn),基本恢復(fù)正常。其余動(dòng)物飲食情況良好,術(shù)后早期有輕度跛行,術(shù)后一周基本恢復(fù)正常。組織形態(tài)學(xué)方面:術(shù)后3周的標(biāo)本顯示:A組的結(jié)合面間可見(jiàn)部分軟骨細(xì)胞增生,骨小梁周?chē)谐晒羌?xì)胞增生。B組的骨隧道與肌腱結(jié)合面間可見(jiàn)軟骨細(xì)胞并逐漸鈣化成骨,原有骨小梁周?chē)写罅砍晒羌?xì)胞增生。C組顯示移植腱周?chē)鷥H有大量細(xì)胞

6、外膠原纖維生成,呈不規(guī)則結(jié)構(gòu),偶爾可見(jiàn)膠原纖維與骨隧道的連接。術(shù)后6周標(biāo)本顯示:A組的結(jié)合面間有部分新骨生成,組織中含有部分成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞。B組的骨隧道與肌腱結(jié)合面可見(jiàn)新骨生成,組織中含有較多成骨細(xì)胞,移植腱與新生骨部分形成纖維軟骨連接。C組的骨隧道與肌腱結(jié)合面間有大量纖維組織增生和成纖維細(xì)胞形成纖維帶。術(shù)后12周標(biāo)本顯示:A組的結(jié)合面間有大量新骨生成,大部分腱-骨間呈連續(xù)性纖維軟骨連接。B組的骨隧道與肌腱結(jié)合面間幾乎全部有新骨生成

7、,骨-腱間呈連續(xù)性纖維軟骨連接,形成類(lèi)似正常的韌帶止點(diǎn)結(jié)構(gòu)。C組的骨隧道與肌腱結(jié)合面間僅見(jiàn)少量新骨的生成,骨-腱結(jié)合面間可見(jiàn)部分肌腱與周?chē)墙M織呈纖維軟骨連接。在生物力學(xué)方面:第3周時(shí)ABC三組的力學(xué)結(jié)果分別為14.60±1.49N、15.03±1.57N、13.99±1.40N,力學(xué)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行多個(gè)獨(dú)立樣本比較的秩和檢驗(yàn),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.269)。進(jìn)一步進(jìn)行兩兩比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。6周時(shí)力學(xué)試驗(yàn)三組的力學(xué)結(jié)果分別為19

8、.34±1.68N、23.92±1.24N、16.42±1.53N,力學(xué)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行多個(gè)獨(dú)立樣本比較的秩和檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)。進(jìn)一步進(jìn)行空白對(duì)照組與α2巨球蛋白比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。空白對(duì)照組與骨保護(hù)素比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。α2巨球蛋白與骨保護(hù)素比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。12周后力學(xué)試驗(yàn)三組的力學(xué)結(jié)果分別為41.25±1.78N、45.31±1.67N、34.

9、41±1.48N,力學(xué)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行多個(gè)獨(dú)立樣本比較的秩和檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.009)。進(jìn)一步進(jìn)行空白對(duì)照組與α2巨球蛋白比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)?？瞻讓?duì)照組與骨保護(hù)素比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。α2巨球蛋白與骨保護(hù)素比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論:對(duì)膝關(guān)節(jié)前交叉韌帶重建術(shù)后骨腱愈合研究的結(jié)果顯示:膝關(guān)節(jié)前交叉韌帶重建術(shù)后骨腱界面加入α2巨球蛋白、骨保護(hù)素,經(jīng)過(guò)組織