高血糖、高胰島素對內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及Mn-SOD表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：1.體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)；2.了解糖尿病高胰島素及高血糖的改變對內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響。3.觀察糖尿病高胰島素及高血糖的改變對內(nèi)皮細(xì)胞錳超氧化物歧化酶(Mn-SOD)表達(dá)及細(xì)胞培養(yǎng)基總SOD活力的影響。 方法：1.引進(jìn)臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞系ECV-304，參照文獻(xiàn)進(jìn)行體外培養(yǎng)，通過形態(tài)學(xué)觀察和免疫熒光法進(jìn)行細(xì)胞鑒定；2.將培養(yǎng)成功的HUVEC在模擬2型糖尿病進(jìn)展過程中高糖、高胰島素的環(huán)境，分別孵育72小時(shí)用Ca

2、pase-Glo(R)3/7Reagent測定各組細(xì)胞凋亡情況；3.用不同濃度血糖、胰島素的培養(yǎng)基培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞，然后提取細(xì)胞總RNA，應(yīng)用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(SQ-RT-PCR)法，檢測Mn-SOD的表達(dá)水平；4.用南京建成生物工程研究所總SOD測定試劑盒測定各組細(xì)胞培養(yǎng)基總SOD活性。 結(jié)果：1.經(jīng)相差顯微鏡觀察及Ⅷ因子染色證實(shí)培養(yǎng)的細(xì)胞是內(nèi)皮細(xì)胞(EC)，臺盼藍(lán)染色顯示95％以上的內(nèi)皮細(xì)胞存活良好；2.內(nèi)皮細(xì)胞在高糖、

3、高胰島素條件下凋亡顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中在高血糖階段凋亡最明顯；3.高血糖及高胰島素對Mn-SOD表達(dá)均有不良影響，高胰島素和/或高血糖階段Mn-SOD表達(dá)均有下降(P＜0.05)；4.細(xì)胞培養(yǎng)基總SOD活力并不是伴隨凋亡增加及Mn-SOD表達(dá)改變而變化。 結(jié)論：本研究證實(shí)了HUVEC可以對血糖及胰島素的刺激產(chǎn)生反應(yīng)，說明2型糖尿病在進(jìn)展過程中，胰島素和血糖濃度的改變對內(nèi)皮細(xì)胞抗氧化能力有一定影響，即使