酒精對胰島β細(xì)胞胰島素分泌及凋亡影響的研究.pdf

1、本課題擬在體外觀察酒精直接對胰島β細(xì)胞胰島素分泌功能和凋亡的影響并探討相關(guān)機(jī)制，以期揭示酒精與糖尿病患病危險性之間關(guān)系的機(jī)理，為指導(dǎo)人們合理消費(fèi)酒精飲料提供科學(xué)依據(jù)。本研究主要包括三部分，現(xiàn)將結(jié)果報告如下： 第一部分:大鼠胰島的原代培養(yǎng)及小鼠胰島瘤細(xì)胞(NIT-1細(xì)胞)培養(yǎng)方法的建立 一.大鼠胰島的原代培養(yǎng)及鑒定 目的:建立大鼠胰島的原代培養(yǎng)方法，為本課題研究提供足夠純凈、存活且具有良好功能的胰島。 結(jié)論

2、:通過對胰島分離純化方法的摸索和改進(jìn)，我們認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)使用單一的Histopaque-1077進(jìn)行純化，是一種能夠獲得大量純度較高且活性好的胰島的高效簡便的分離方法，為深入進(jìn)行相關(guān)研究奠定了基礎(chǔ)。 二.小鼠胰島瘤細(xì)胞(NIT-1細(xì)胞)培養(yǎng)及胰島素分泌功能鑒定 目的:分泌胰島素的細(xì)胞為胰島β細(xì)胞，為了更深入研究酒精對胰島β細(xì)胞功能和凋亡的影響，我們把一種胰島β細(xì)胞系即小鼠胰島瘤細(xì)胞(NIT-1細(xì)胞)亦作為研究對象。對NIT-

3、1細(xì)胞分泌胰島素功能進(jìn)行鑒定并選擇最適合的培養(yǎng)條件是本部分的研究目的。 結(jié)論:NIT-1最適宜的培養(yǎng)條件為含5.6mmol/L葡萄糖濃度的DMEM培養(yǎng)基。用于本實(shí)驗(yàn)研究的NIT-1細(xì)胞具有良好的胰島素分泌功能和對不同濃度葡萄糖刺激的良好的反應(yīng)能力。 第二部分:酒精對胰島β細(xì)胞分泌胰島素功能的影響及相關(guān)機(jī)制研究 一.酒精對胰島β細(xì)胞分泌胰島素功能影響的研究 目的:觀察不同劑量酒精作用不同時間后，葡萄糖刺激的

4、胰島素分泌(GSIS)情況從而揭示酒精對胰島β細(xì)胞分泌胰島素功能影響的規(guī)律。 結(jié)論:酒精對胰島β細(xì)胞胰島素分泌的影響與酒精作用時間、劑量有關(guān)。 二.酒精對NIT-1細(xì)胞胰島素(INS)、細(xì)胞色素氧化酶Ⅱ(CytochromeoxidaseⅡ，COXⅡ)以及大鼠原代培養(yǎng)胰島INSmRNA表達(dá)的影響 目的:選取在葡萄糖刺激胰島素分泌過程中的兩個關(guān)鍵環(huán)節(jié)即胰島素基因和細(xì)胞色素氧化酶Ⅱ基因mRNA表達(dá)的變化探討酒精對胰島

5、β細(xì)胞分泌胰島素功能影響的機(jī)理。 結(jié)論:酒精對胰島β細(xì)胞INSmRNA、COXⅡmRNA表達(dá)改變可能是其影響胰島素分泌功能改變的有關(guān)機(jī)制。 第三部分酒精對NIT-1細(xì)胞凋亡作用 一.酒精對NIT-1細(xì)胞凋亡的影響 目的:觀察酒精對NIT-1細(xì)胞凋亡的影響. 結(jié)論：酒精可以誘導(dǎo)NIT-1細(xì)胞發(fā)生凋亡。 二.酒精對NIT-1細(xì)胞凋亡機(jī)制的探討 目的:從氧化應(yīng)激的角度探討酒精誘導(dǎo)NIT-