基于SSR標(biāo)記的葡萄品種鑒定及葡萄脫毒種苗遺傳穩(wěn)定性研究.pdf

1、針對(duì)葡萄種苗早期形態(tài)學(xué)鑒定難度較大，葡萄通過(guò)莖尖超低溫脫毒處理后的再生植株存在變異的可能性等問(wèn)題，本研究在葡萄SSR反應(yīng)體系的基礎(chǔ)上進(jìn)行了優(yōu)化，并利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)釀酒葡萄品種進(jìn)行了品種鑒定和脫毒種苗的遺傳穩(wěn)定性分析。利用SSR分子標(biāo)記分析了寧夏栽培的14個(gè)釀酒葡萄品種的親緣關(guān)系，篩選的不同引物及組合可滿足對(duì)這14個(gè)葡萄品種進(jìn)行品種鑒定的要求;分析了4種經(jīng)過(guò)超低溫脫毒處理后種苗的遺傳穩(wěn)定性，為釀酒葡萄品種早期鑒定以及脫毒種苗遺傳穩(wěn)

2、定性研究提供了參考依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　1.優(yōu)化了適合葡萄SSR反應(yīng)的體系為:模板DNA的量為10 ng-30 ng，Mg2+濃度為3.0mmol·L-1，dNTP濃度為0.10 mmol·L-1，TaqDNA聚合酶的量為1.0U，引物濃度為0.2μmol·L-1，總體積為10μL，剩下的用ddH2O補(bǔ)充;確定了適合葡萄SSR反應(yīng)擴(kuò)增程序?yàn)?94℃預(yù)變性5 min;94℃變性30s，54℃-64℃（不同引物有差別）退火30

3、s，72℃延伸1min（循環(huán)35次）;72℃延伸10min。
　　2.從110對(duì)引物中篩選出可以穩(wěn)定擴(kuò)增且多態(tài)性高的10對(duì)引物，并利用已篩選出的引物對(duì)14個(gè)釀酒葡萄品種進(jìn)行了檢測(cè)，共檢測(cè)到等位基因74個(gè)，平均每對(duì)引物檢測(cè)到等位基因數(shù)為7.4個(gè)，擴(kuò)增譜帶最多的引物是SP0102，譜帶數(shù)為11條。通過(guò)UPGMA聚類分析能夠?qū)?4種葡萄種質(zhì)聚為三大類，第一大類只含有一個(gè)品種Traminette。第二大類共包含2個(gè)品種，為黑比諾和Cayu

4、ga White，第三大類包含剩下的11個(gè)品種。
　　3.通過(guò)SSR標(biāo)記技術(shù)，并利用NTSYSpc Version2.10e軟件的分析，根據(jù)引物的鑒別效率，篩選出最為高效引物SP0097，對(duì)14個(gè)待測(cè)品種均能擴(kuò)增出多態(tài)性譜帶，可以一次就將14個(gè)品種區(qū)分開(kāi)來(lái)，另外利用其余9對(duì)引物組合出23組也可以鑒別出14個(gè)品種，大大提高了品種鑒定的準(zhǔn)確性。
　　4.利用110對(duì)SSR引物對(duì)4種經(jīng)過(guò)超低溫脫毒的種苗進(jìn)行了穩(wěn)定性檢測(cè)，結(jié)果表明脫