適合棉花品種鑒定的SSR核心引物的篩選和品種鑒別.pdf

1、快速準(zhǔn)確地鑒定作物品種對(duì)于品種審定、品種保護(hù)、假種辨別、產(chǎn)權(quán)糾紛均有重要作用，因此對(duì)快速、高效、穩(wěn)定的品種鑒定技術(shù)研究具有重要意義，SSR分子標(biāo)記因其自身具備的優(yōu)點(diǎn)在品種鑒定中得到越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。本研究旨在參考前人研究的基礎(chǔ)上，篩選出適合棉花品種鑒定的核心引物，形成一套適合棉花品種指紋鑒定技術(shù)體系，并利用核心引物對(duì)2009年參加山東省棉花區(qū)試的67份品系的真實(shí)性進(jìn)行鑒定，同時(shí)對(duì)參試品種（系）進(jìn)行遺傳多樣性分析，主要結(jié)果如下：
　

2、　 1.研究確立了一套快速適合棉花品種鑒定的SSR檢測(cè)體系：使用兩種不同的提取方法分別提取棉花葉片和種子的DNA，利用TD-PCR反應(yīng)程序提高了PCR反應(yīng)的特異性和靈敏性，采用了快速銀染的方法，提高了銀染的效率。
　　 2.從CMD、CottonDB數(shù)據(jù)庫(kù)和文獻(xiàn)資料公布的引物中選取了2000對(duì)引物，對(duì)32份通過(guò)審定大面積推廣的棉花主推品種基因組DNA進(jìn)行了多態(tài)性篩選，共篩選到26對(duì)核心引物，其條帶清晰，多態(tài)性高，穩(wěn)定性好，占總

3、引物數(shù)量的1.3％，26對(duì)核心引物覆蓋了棉花的20條染色體。利用數(shù)目依次減少的核心引物（26對(duì)，11對(duì)，8對(duì)）的指紋數(shù)據(jù)，對(duì)32份審定品種進(jìn)行UPGMA聚類(lèi)分析，11對(duì)核心引物和26對(duì)核心引物所反映的32份審定品種間DNA水平的差異基本吻合，當(dāng)引物減少到8對(duì)時(shí)，每個(gè)大類(lèi)別所包含的品種有大的變化，且品種間遺傳相似系數(shù)也有較大的差別，所以將11對(duì)核心引物確定為首選核心引物。
　　 3.提出了核心引物理論上可區(qū)分的最大品種數(shù)的計(jì)算公式

4、：N=G1×...×Gn，出現(xiàn)相同指紋圖譜的概率為：P=1/N；11對(duì)首選核心引物理論上可區(qū)分的最大品種數(shù)為419904個(gè)，出現(xiàn)相同指紋圖譜的概率為：2.38×10-6，理論推測(cè)結(jié)果表明11對(duì)首選核心引物進(jìn)行棉花品種鑒定是可行的。
　　 4.32份審定品種的DNA指紋數(shù)據(jù)的聚類(lèi)分析結(jié)果基本反映了品種來(lái)源的系譜，有共同親本的品種其遺傳相似系數(shù)大，且聚為相同類(lèi)別，11對(duì)核心引物所反映的32份品種間DNA水平上的差異與品種來(lái)源的系譜分

5、析結(jié)果基本吻合。
　　 5.11對(duì)首選核心引物對(duì)匿名取樣品種的真實(shí)性進(jìn)行了指紋鑒定，結(jié)果表明，該品種DNA指紋圖譜與為鑫秋4號(hào)棉花品種圖譜一致，與匿名取樣品種完全相符。
　　 6.利用11對(duì)首選核心引物，對(duì)參加2009年山東省棉花區(qū)試的67個(gè)品系進(jìn)行了DNA指紋鑒定，結(jié)果表明，省區(qū)試4號(hào)和魯棉研37號(hào)疑為同一品種，省區(qū)試15號(hào)和邯棉559疑為同一品種；省區(qū)試38號(hào)和省區(qū)試45號(hào)疑為同一品系，省區(qū)試11號(hào)和省區(qū)試46號(hào)疑為