甘藍(lán)主要品種鑒定與遺傳純度快速檢測(cè).pdf

1、甘藍(lán)是常異花授粉作物，具有明顯的雜種優(yōu)勢(shì)。本研究利用多種分子標(biāo)記對(duì)甘藍(lán)類蔬菜品種進(jìn)行種質(zhì)資源鑒定及遺傳多樣性分析，并對(duì)甘藍(lán)主栽品種進(jìn)行遺傳純度鑒定，通過建立標(biāo)準(zhǔn)DNA指紋圖譜，進(jìn)行新品種登記和品種鑒定、品種的真實(shí)性和純度檢驗(yàn)，對(duì)于良種質(zhì)量檢測(cè)、種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化、保護(hù)名優(yōu)特種質(zhì)及育成品種的知識(shí)產(chǎn)權(quán)和育種家的權(quán)益、種質(zhì)的親緣關(guān)系和分類與進(jìn)化研究等，都將產(chǎn)生積極的推動(dòng)作用。 本研究用RAPD、ISSR、SRAP、SSR等分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)甘

2、藍(lán)商品雜交種‘早夏16’進(jìn)行了遺傳純度檢測(cè)。以早夏16父母本及F<,1>為材料，基因組對(duì)157個(gè)RAPD隨機(jī)擴(kuò)增引物、72個(gè)ISSR引物、84對(duì)SRAP引物組合和44對(duì)SSR引物組合進(jìn)行了分析，產(chǎn)生了父母本特異性標(biāo)記約8個(gè)，3個(gè)RAPD引物NAURP2006，NAURP2020與NAURP2031，2個(gè)ISSR引物NAUISRl 058與NAUISR1062，1個(gè)SRAP引物組合NAUSR04/NAURS05，2個(gè)SSR引物組合NAUS

3、SR1011和NAUSSR1031。這8個(gè)引物均能在F<,1>雜種中擴(kuò)增出父母本特異標(biāo)記。利用這8個(gè)能同時(shí)產(chǎn)生父母本特異標(biāo)記的引物對(duì)純度鑒定圃中的210個(gè)F<,1>單株進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示，NAURP2006共檢測(cè)到10個(gè)假雜種，NAURP2020、NAURP2031和NAUSSR1011檢測(cè)到12個(gè)假雜種，NAUISR1058、NAUISR1062、NAUSR04/NAURS05和NAUSSR1031分析共檢測(cè)到11個(gè)假雜種，其中有9

4、個(gè)單株在這8個(gè)引物中表現(xiàn)一致，表現(xiàn)為僅產(chǎn)生了母本特異條帶，推測(cè)是由于制種過程中母本自交產(chǎn)生的假雜種。標(biāo)記分析結(jié)果與田問純度鑒定結(jié)果高度一致，表明RAPD、ISSR、SRAP和SSR技術(shù)是鑒定甘藍(lán)商品雜交種子純度的穩(wěn)定高效的方法。 利用RAPD、ISSR和SSR三種分子標(biāo)記對(duì)甘藍(lán)雜交種新夏50進(jìn)行了遺傳純度的鑒定。利用83個(gè)RAPD引物、49個(gè)ISSR引物及56對(duì)SSR引物對(duì)新夏50父母本及F<,1>DNA進(jìn)行了分析。引物篩選結(jié)果

5、顯示，2個(gè)RAPD引物(NAURP2068 and NAURP2079)，2個(gè)ISSR引物(NAUISR1034 and NAUISRl062)和1個(gè)SSR引物(NAUSSR1011)在F<,1>雜種中同時(shí)產(chǎn)生了父本特異條帶和母本特異條帶，可以成功用于雜種遺傳純度的檢測(cè)。利用這5個(gè)引物對(duì)雜種新夏50進(jìn)行了基因型的檢測(cè)。在所檢測(cè)的228個(gè)F<,1>雜種單株中，有16個(gè)單株表現(xiàn)為假雜種，其中8個(gè)單株的電泳圖譜與5個(gè)引物檢測(cè)的母本帶型一致，可

6、能是由于母本自交所產(chǎn)生的假雜種。結(jié)果表明，RAPD、ISSR和SSR分子標(biāo)記是雜交種種子質(zhì)量控制過程的有效工具。 本研究利用RAPD、ISSR、SRAP三種分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)上海地區(qū)及其周邊城市33個(gè)甘藍(lán)主栽品種及1個(gè)青花菜、1個(gè)花椰菜品種進(jìn)行了分析。從150個(gè)RAPD引物、64個(gè)ISSR引物及84對(duì)SRAP中挑選了多態(tài)性引物RAPD17個(gè)，ISSR20個(gè)，SRAP15對(duì)對(duì)35個(gè)甘藍(lán)類品種基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增。RAPD擴(kuò)增結(jié)果顯示共

7、產(chǎn)生了170條擴(kuò)增帶，平均每個(gè)引物擴(kuò)增出10條，其中多態(tài)性條帶124條，多態(tài)率為72.9％；ISSR擴(kuò)增結(jié)果顯示共產(chǎn)生159條清晰帶，其中多態(tài)性條帶123條，平均每個(gè)引物擴(kuò)增出7.95條，多態(tài)率為77.4％；sRAP擴(kuò)增結(jié)果顯示共產(chǎn)生了157條擴(kuò)增帶，其中多態(tài)性條帶為118條，平均每個(gè)引物擴(kuò)增出10.47條，多態(tài)率為75.16％；說明35個(gè)甘藍(lán)類品種內(nèi)存在較高的多態(tài)性。其中引物me7-1/em11-1的多態(tài)性最高，有14條多態(tài)性條帶，多

8、態(tài)性條帶的百分率為93.33％，該引物可以區(qū)分30個(gè)供試品種。利用其中兩個(gè)引物NAURP1068和me7-1/em11-1在35個(gè)品種間擴(kuò)增出的多態(tài)性標(biāo)記可將全部品種鑒別。三種標(biāo)記聚類圖譜均顯示青花菜、花椰菜與甘藍(lán)品種遺傳關(guān)系較遠(yuǎn)。研究結(jié)果表明RAPD、ISSR、SRAP三種分子標(biāo)記技術(shù)均能有效地應(yīng)用于甘藍(lán)類蔬菜作物的品種鑒定，且利用多種分子標(biāo)記綜合分析甘藍(lán)類品種之間的遺傳關(guān)系更加準(zhǔn)確、可靠。 根據(jù)本文的研究結(jié)果，表明分子標(biāo)記(