冷鮮雞全產(chǎn)業(yè)鏈彎曲菌生態(tài)分布特征及其冷藏條件下失活模型的建立.pdf

1、彎曲菌屬（Campylobacter spp.）是近四十年來人類公共健康問題的重要病原菌，可導(dǎo)致人類細(xì)菌性腹瀉，其中空腸彎曲菌（C.jejuni）和結(jié)腸彎曲菌(C.coli)感染最常見。家禽是彎曲菌屬的主要宿主，禽源產(chǎn)品也成為彎曲菌感染人類的主要途徑。因此，了解冷鮮雞全產(chǎn)業(yè)鏈彎曲菌屬生態(tài)分布特征對控制彎曲菌的污染風(fēng)險(xiǎn)極為重要。本研究在彎曲菌分子鑒定和分離培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，開展冷鮮雞全產(chǎn)業(yè)鏈“養(yǎng)-宰-售”各環(huán)節(jié)中該菌的生態(tài)分布特征和多位點(diǎn)序列

2、分型(MLST)研究，結(jié)合冷藏條件下彎曲菌失活動(dòng)力學(xué)模型，以及有機(jī)酸對雞肉中的空腸彎曲菌抑菌效果分析，為在冷鮮雞全產(chǎn)業(yè)鏈中該菌的控制提供數(shù)據(jù)和技術(shù)支撐。
　　1.彎曲菌分子檢測方法的建立及增首條件優(yōu)化
　　本研究建立了空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌的多重PCR方法以及空腸彎曲菌熒光定量PCR檢測方法。多重PCR方法檢測空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌特異性好，檢測C.jejuni，C.coli靈敏度為分別為2.2×103CFU/mL和3.8×

3、104CFU/mL。針對空腸彎曲的mapA基因建立了熒光定量PCR方法，該方法特異、快速，檢測下限為102CFU/mL，以細(xì)菌點(diǎn)板計(jì)數(shù)后抽提的DNA為標(biāo)準(zhǔn)品建立了標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線呈良好的線性關(guān)系，R2=0.98，斜率為-3.5441，擴(kuò)增效率為97.6％，可用于臨床樣品的細(xì)菌數(shù)檢測。
　　2.彎曲菌冷鮮雞全產(chǎn)業(yè)鏈中的生態(tài)分布特征
　　對浙江省內(nèi)多個(gè)地區(qū)家禽養(yǎng)殖場、家禽屠宰環(huán)境及市售雞肉等樣品進(jìn)行多重PCR檢測，結(jié)果表明，6

4、67份樣品中，空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌檢出率為分別為32.1％和3.4％;兩種彎曲菌在養(yǎng)殖場、家禽屠宰場和市場的檢出率分別為39.8％(74/186)、25％(79/316)和56.1％(69/123);農(nóng)貿(mào)市場樣品中彎曲菌的檢出率比超市樣高(61.7％ vs11.9％)。通過對家禽屠宰過程中空腸彎曲菌的動(dòng)態(tài)變化監(jiān)測，屠宰環(huán)節(jié)中的卸貨間、凈膛間、噴淋間的家禽攜帶空腸彎曲菌較高，大于4.0log10CFU，環(huán)境中的包裝間地面、儲(chǔ)物間和冷凍庫

5、貨筐帶菌量多。消毒預(yù)冷環(huán)節(jié)從開始屠宰的兩個(gè)小時(shí)開始可以檢測到空腸彎曲菌，并且細(xì)菌數(shù)量隨著屠宰時(shí)間的延長而增加，屠宰開始后6h時(shí)達(dá)到最高，其中預(yù)冷池二中空腸彎曲菌濃度可達(dá)5.36log10CFU/mL，與雞胴體中細(xì)菌攜帶率變化一致。
　　3.空腸彎曲菌分離株的多位點(diǎn)序列分型
　　本研究對來自養(yǎng)雞場、屠宰場以及市場出售冷鮮雞的空腸彎曲菌分離株進(jìn)行多位點(diǎn)序列分型，79株空腸彎曲菌分離株共有30個(gè)不同序列型，其中有13個(gè)是新發(fā)現(xiàn)的序

6、列型(43.3％)，包含50株分離株。等位基因值數(shù)量最多的是pgm(15)，最少的為uncA(8)。79株分離株中共有10株有新的等位基因值。所有管家基因中新的等位基因值分別有:aspA（1個(gè)），glnA（1個(gè)），glyA（2個(gè)），pgm（2個(gè)），glyA、 tkt和uncA沒有新的等位基因值。不同來源空腸彎曲菌分離株的序列型復(fù)雜性存在一定的差異，養(yǎng)殖場樣品的43個(gè)菌株有7種序列型，屠宰場樣品7株中有4種序列型，市場樣品的29株中有21

7、種序列型，其中ST298存在于養(yǎng)殖、屠宰環(huán)節(jié)，ST7922存在于屠宰和市場環(huán)節(jié)中。
　　4.冷藏條件下彎曲菌失活動(dòng)力學(xué)模型
　　通過雞肉中的空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌在6℃條件下30d內(nèi)失活規(guī)律研究，擬合得到了兩種菌在6℃條件下log-logistic的一級生長預(yù)測模型。在4℃、8℃和16℃條件下貯藏8d內(nèi)，log-logistic模型對空腸彎曲菌的失活規(guī)律依然有較好的擬合性。醋酸、乙酸和檸檬酸三種減菌劑來模擬消毒環(huán)節(jié)，用醋酸浸