胃癌ZNF139mRNA表達(dá)及與RUNX3基因甲基化關(guān)系的研究.pdf

1、目的:胃癌是可以發(fā)生在胃各個(gè)部位的常見惡性腫瘤，有著很高的發(fā)病率和病死率。我國是胃癌大國，全球每年新發(fā)胃癌100余萬，僅我國就占了其中的42％，而每年死于胃癌的患者約有80萬，我國占了35％。我國是胃癌發(fā)病率和死亡率最高的國家之一，胃癌的發(fā)病率和死亡率都是世界平均水平的兩倍多。我國每年有近四十萬的新發(fā)胃癌患者，也就是說，平均每三分鐘就有一名中國人死于胃癌。即便是國內(nèi)領(lǐng)先的醫(yī)院，晚期患者五年生存率也只有百分之四十六點(diǎn)三，低于國際先進(jìn)水平。

2、因此，對胃癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的研究極為重要。腫瘤在本質(zhì)上是基因病。人體的正常細(xì)胞經(jīng)受各種外界環(huán)境因素以及自身的遺傳致癌因素后，其DNA發(fā)生改變，主要表現(xiàn)在原癌基因被激活和（或）腫瘤抑制基因的沉默兩個(gè)方面。如果這種DNA損傷不能被修復(fù)，且通過轉(zhuǎn)錄、翻譯繼而在蛋白質(zhì)水平不斷被放大，經(jīng)過一個(gè)漫長的多階段的演進(jìn)過程，細(xì)胞不但可以相對無限制的增殖下去，而且還能獲得浸潤和轉(zhuǎn)移的能力（惡性轉(zhuǎn)化），即形成惡性腫瘤。鋅指蛋白是指含有通過結(jié)合Z n2+穩(wěn)定

3、的短的可以自我折疊形成“手指”結(jié)構(gòu)的一類蛋白質(zhì)。由于其自身的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，可以選擇性的結(jié)合特異的靶結(jié)構(gòu)，使鋅指蛋白在基因的表達(dá)調(diào)控、細(xì)胞分化、胚胎發(fā)育等生命過程中發(fā)揮重要作用。Krüppel家族鋅指蛋白是鋅指類轉(zhuǎn)錄因子中龐大的一類，研究證實(shí)許多Krüppel家族鋅指蛋白通過調(diào)控相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，介導(dǎo)腫瘤發(fā)生演進(jìn)。ZNF139屬于鋅指蛋白Krüppel家族成員，目前關(guān)于ZNF139在胃癌發(fā)生演進(jìn)中作用的研究未見報(bào)道。RUNX3基因是新近發(fā)現(xiàn)

4、的一種抑癌基因，屬人runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(human runt-related transcription factor, RUNX)家族成員，是TGF-β信號傳導(dǎo)通路中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，雜合子丟失(LOH)和啟動(dòng)子高甲基化可使其失活，并可導(dǎo)致胃癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。本研究以55例胃癌組織、正常胃粘膜（不同性別、年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分型、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)為研究對象，采用RT-PCR、MSP方法，分別檢測ZNF139 mRNA表達(dá)與

5、RUNX3基因甲基化的狀態(tài)，分析兩者之間的相關(guān)性及此相關(guān)性與臨床生物學(xué)行為的關(guān)系，探討ZNF139在胃癌發(fā)生演進(jìn)中的作用。
　　 方法:收集55例胃癌組織及相應(yīng)的正常胃粘膜，采用RT-PCR、MSP方法，分別檢測ZNF139 mRNA表達(dá)與RUNX3基因甲基化的狀態(tài)，分析兩者之間的相關(guān)性及其與胃癌臨床生物學(xué)行為的關(guān)系。所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS19.0軟件分析，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、ZNF

6、139mRNA在胃癌組織及正常胃粘膜中的表達(dá)及其與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系:
　　 ZNF139 mRNA在胃癌組織中表達(dá)強(qiáng)度明顯高于正常胃粘膜組織(0.6592±0.2291 VS0.3540±0.0836)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.281，P=0.000＜0.05)。胃癌組織中ZNF139mRNA的表達(dá)水平與腫瘤大小、分化程度、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)(P＜0.05)，與患者年齡、性別無關(guān)(P≥0.05)。

7、　　 2、Runx3在胃癌組織及正常胃粘膜中的基因甲基化情況及其與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系:
　　 Runx3在胃癌組織和正常胃粘膜中的甲基化率分別為54.55％(30/55)和7.27％(4/55)，兩者差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=28.778，P=0.000＜0.05)。胃癌組織中Runx3基因的甲基化水平與腫瘤分化程度、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)(P＜0.05)，與腫瘤大小、患者年齡及性別無關(guān)(P≥0.05)。

8、　　 3、胃癌組織中ZNF139 mRNA表達(dá)與RUNX3基因甲基化程度的相關(guān)性及此相關(guān)性與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系:
　　 Runx3基因發(fā)生甲基化的胃癌組織中ZNF139mRNA的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于Runx3基因未發(fā)生甲基化的為胃癌組織(0.8030±0.1952和0.4866±0.1231)，兩者差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.017，P=0.000＜0.05)。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，胃癌組織中Runx3基因的甲基化

9、狀態(tài)和ZNF139mRNA的表達(dá)強(qiáng)度呈高度一致的正相關(guān)性（將ZNF139mRNA≥0.6計(jì)為高表達(dá)，將ZNF139mRNA＜0.6計(jì)為低表達(dá)，McNemar Test=1.000≥0.05，Kappa=0.707)。Runx3基因發(fā)生甲基化和ZNF139mRNA高表達(dá)的一致性與患者的性別、年齡及腫瘤大小無關(guān)(P≥0.05)，而與腫瘤的分化程度、浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.ZNF

10、139mRNA在胃癌組織中的表達(dá)顯著高于正常胃粘膜，其表達(dá)水平與患者性別及年齡無關(guān)，與腫瘤細(xì)胞的分化程度呈負(fù)相關(guān)，與腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，提示ZNF139可能與胃癌的發(fā)生有關(guān)，并參與了胃癌發(fā)展演進(jìn)過程，影響著胃癌患者的預(yù)后。
　　 2.Runx3在胃癌組織發(fā)生甲基化的概率明顯高于其正常胃粘膜中發(fā)生甲基化的概率。Runx3基因的甲基化水平與腫瘤分化程度呈負(fù)相關(guān)，與腫瘤的浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均呈正相關(guān)，與腫瘤大小、

11、患者年齡及性別無關(guān)。提示Runx3基因甲基化可能也對胃癌的發(fā)生、發(fā)展起到了促進(jìn)的作用。
　　 3.發(fā)生Runx3基因甲基化的胃癌組織中ZNF139mRNA的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于未發(fā)生Runx3基因甲基化的為胃癌組織。胃癌組織中Runx3基因的甲基化狀態(tài)和ZNF139mRNA的表達(dá)強(qiáng)度呈高度一致的正相關(guān)性，這種正相關(guān)性與患者的性別、年齡及腫瘤大小無關(guān)，而與腫瘤的分化程度、浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)。提示Runx3可能通過上調(diào)ZNF1