睡眠剝奪對(duì)大鼠顳下頜關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)及p38MAPK蛋白表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討睡眠剝奪(SD)對(duì)大鼠顳頜關(guān)節(jié)區(qū)p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響，以及該通路是否介導(dǎo)了SD對(duì)大鼠顳頜關(guān)節(jié)的損傷。
　　 方法:1、45只wistar雄性大鼠隨機(jī)分成大平臺(tái)對(duì)照2d組、對(duì)照4d組、對(duì)照6d組、對(duì)照8d組，SD2d組、SD4d組、SD6d組、SD8d組以及空白對(duì)照組，每組5只;各組大鼠在同一籠中飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)前，將各組大鼠放入各自的模型中，不施加任何刺激，使其熟悉環(huán)境一周。SD組大鼠采用改良多平臺(tái)法建立睡眠剝奪

2、模型。睡眠剝奪箱的長(zhǎng)、寬、高分別為110cm×70cm×40cm，其內(nèi)放置15個(gè)高為8cm、直徑為6.3cm的平臺(tái)，其周圍注滿水，平臺(tái)高于水面約1cm。大鼠在平臺(tái)上能自由飲水、攝食，但要睡眠時(shí)因頭觸水中而驚醒，以致被睡眠剝奪。大平臺(tái)對(duì)照組除平臺(tái)直徑增大，其余因素與SD組一致，大鼠在大平臺(tái)上可以進(jìn)行部分自由活動(dòng)，并可以進(jìn)入睡眠。空白對(duì)照組正常飼養(yǎng)。
　　 2、大鼠在建模成功后分別對(duì)實(shí)驗(yàn)2d組、4d組、6d組、8d組、空白對(duì)照組大鼠

3、HE染色觀察同一部位的顳頜關(guān)節(jié)切片形態(tài)變化，免疫組化SP法檢測(cè)大鼠顳頜關(guān)節(jié)區(qū)（髁突）磷酸化p38MAPK蛋白的表達(dá)，并與對(duì)照組進(jìn)行比較。
　　 3、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn):將大鼠放已制備好的曠場(chǎng)試驗(yàn)箱中。計(jì)算大鼠5min內(nèi)水平活動(dòng)得分和垂直活動(dòng)得分。
　　 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPASS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:1、一般狀態(tài)觀察:實(shí)驗(yàn)中，隨SD時(shí)間延長(zhǎng)，SD組大鼠有恐慌、行

4、為反應(yīng)敏感、激烈等表現(xiàn);對(duì)照組則表現(xiàn)正常。
　　 2、HE染色觀察:對(duì)照組大鼠髁狀突軟骨由淺入深依次分為纖維性關(guān)節(jié)表面帶、多細(xì)胞帶、纖維軟骨帶和鈣化軟骨帶。對(duì)照組髁突、關(guān)節(jié)盤均未見明顯變化。SD2d組、4d組可見大鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁突表面部分膠原纖維水腫、松解，部分關(guān)節(jié)盤出現(xiàn)炎性反應(yīng)。SD6d組組織變化較明顯，關(guān)節(jié)盤出現(xiàn)玻璃樣變性、溶解斷裂，甚至形成裂隙，髁突纖維軟骨內(nèi)有的骨細(xì)胞消失，骨陷窩空虛。SD8d組與SD6d組大鼠顳頜關(guān)節(jié)結(jié)

5、構(gòu)變化類似，部分標(biāo)本結(jié)構(gòu)較6d組減輕。
　　 3、免疫組化SP法顯示:磷酸化MKK6主要在細(xì)胞質(zhì)表達(dá)，陽性染色呈棕黃色或黃色。對(duì)照組少見磷酸化MKK6陽性細(xì)胞，SD組中磷酸化MKK6陽性細(xì)胞較對(duì)照組增多(P＜0.05)，染色深棕，且隨SD時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增多，于SD6d達(dá)到峰值。磷酸化P38MAPK主要在細(xì)胞核表達(dá)，少量在細(xì)胞質(zhì)表達(dá)，陽性染色呈棕黃色或黃色。對(duì)照組少見磷酸化P38MAPK陽性細(xì)胞，SD組中磷酸化P38MAPK陽性細(xì)胞

6、較對(duì)照組增多(P＜0.05)，染色深棕，且隨SD時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增多，于SD6d達(dá)到峰值。
　　 4、曠場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)果顯示:空白對(duì)照組與大平臺(tái)對(duì)照組比較，大鼠水平活動(dòng)評(píng)分、垂直活動(dòng)均無差異(P＞0.05)。SD2d、4d、6d、8d組與相應(yīng)大平臺(tái)對(duì)照組比較，SD組大鼠水平活動(dòng)評(píng)分、垂直活動(dòng)評(píng)分均明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)
　　 結(jié)論:曠場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)果顯示該睡眠剝奪模型是理想的心理應(yīng)激模型，能夠有效模擬人類受到外界因素影響后的情緒

7、心理變化。HE結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，SD組大鼠顳頜關(guān)節(jié)的結(jié)構(gòu)在睡眠剝奪4d時(shí)開始出現(xiàn)明顯的改變，表現(xiàn)為髁突表面部分區(qū)域凹凸不平，表面膠原纖維水腫、松解。關(guān)節(jié)盤出現(xiàn)炎性反應(yīng)，于睡眠剝奪6d時(shí)損傷最嚴(yán)重，8d時(shí)出現(xiàn)一定的適應(yīng)性改變。免疫組化結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，磷酸化MKK6、磷酸化P38MAPK陽性細(xì)胞數(shù)隨SD時(shí)間延長(zhǎng)而增多，于SD6d達(dá)到高峰。本研究結(jié)果表明睡眠剝奪應(yīng)激性的激活了大鼠顳頜關(guān)節(jié)區(qū)P38MAPK通路，該通路可能介導(dǎo)了對(duì)大