針刺血清對哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞p38MAPK表達(dá)的調(diào)控.pdf

1、目的：觀察針刺血清對哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞p38 MAPK表達(dá)的影響，進(jìn)而探討針刺血清抗哮喘的作用機(jī)制。
　　方法：將30只SPF級雄性SD大鼠隨機(jī)分為空白組、哮喘模型組及哮喘模型針刺組，每組10只。采用卵蛋白霧化吸入法制作大鼠哮喘模型，通過“三穴五針”法對哮喘模型針刺組大鼠進(jìn)行針刺干預(yù)。動物飼養(yǎng)結(jié)束后，對空白組和哮喘模型針刺組大鼠進(jìn)行腹主動脈取血，離心后抽取上清、220nm過濾除菌，56℃滅活備用于氣道平滑肌細(xì)胞干預(yù)。通過檢測大

2、鼠氣道阻力和肺順應(yīng)性、肺泡灌洗液中炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)以及肺組織HE染色判定大鼠哮喘模型的建立。采用不過篩酶消化法原代培養(yǎng)氣道平滑肌細(xì)胞，通過傳代純化細(xì)胞，并通過形態(tài)學(xué)觀察及免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定細(xì)胞。用針刺血清體外干預(yù)哮喘大鼠的氣道平滑肌細(xì)胞，通過MTT比色法檢測針刺血清體外干預(yù)的最適濃度。空白組與哮喘模型組的氣道平滑肌細(xì)胞分別給予空白血清、針刺血清及阻斷劑（SB203580）干預(yù)。通過免疫細(xì)胞化學(xué)法、Western blot法及RT-PCR法測

3、定氣道平滑肌細(xì)胞中p38MAPK的表達(dá)。
　　結(jié)果：1與空白組相比，哮喘模型組大鼠肺順應(yīng)性降低，肺彈性阻力增高；與哮喘模型組相比，哮喘模型針刺組大鼠的肺順應(yīng)性增高，肺彈性阻力降低。2與空白組相比，哮喘模型組的肺泡灌洗液中炎癥細(xì)胞明顯增多；與哮喘模型組相比，哮喘模型針刺組大鼠肺泡灌洗液中炎癥細(xì)胞減少。3大鼠肺組織HE染色顯示，哮喘模型組大鼠支氣管壁有大量炎性浸潤，管腔內(nèi)黏液與紅細(xì)胞增多，且氣道壁增厚、變形；而針刺組大鼠肺組織管腔內(nèi)黏

4、液及紅細(xì)胞顯著減少，管壁的炎性細(xì)胞浸潤性破壞亦顯著減少。4采用改良后的組織貼塊法可獲得純度較高、數(shù)量較大的氣道平滑肌細(xì)胞。5針刺血清體外干預(yù)氣道平滑肌細(xì)胞的最適濃度為20％。6經(jīng)空白血清干預(yù)的哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞的p-p38MAPK蛋白表達(dá)顯著高于空白組細(xì)胞及經(jīng)針刺血清、阻斷劑干預(yù)的哮喘模型組細(xì)胞。7經(jīng)空白血清干預(yù)的哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞的p38MAPK基因表達(dá)高于空白組細(xì)胞及經(jīng)針刺血清、阻斷劑干預(yù)的哮喘模型組細(xì)胞。
　　結(jié)論：