慢性睡眠紊亂對大鼠顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎軟骨血管新生的影響.pdf

1、目的:
　　顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎(temporomandibular joint osteoarthritis，TMJ-OA)是一類較嚴重的顳下頜關(guān)節(jié)紊亂病(temporomandibular disorders，TMD)。TMJ-OA的病因目前尚未完全闡明。本課題目的是探討慢性睡眠紊亂(Chronic sleepdisturbance CSD)與TMJ-OA的關(guān)系，明確血管新生是否存在于TMJ-OA中，以及調(diào)控血管新生的血管內(nèi)皮生

2、長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)，Delta-like4(DII4)以及磷酸化的細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2(phosphatedextracellular regulated protein kinases，p-ERK1/2)的表達水平的變化，明確DII4和p-ERK1/2的表達有無相關(guān)性。
　　方法:
　　將180只雄性Wistar大鼠隨機分為3組:對照(CON)組，慢

3、性睡眠紊亂(CSD)組，恢復(fù)(R)組，每組60只。每個大組分別分為3個亞組:4周(4w)組、6周(6w)組、8周(8w)組，每個亞組20只大鼠。
　　采用改良多平臺法(modified multiple platform method，MMPM)建立大鼠慢性睡眠紊亂模型。測定大鼠血清中皮質(zhì)酮(corticosterone，CORT)和促腎上腺皮質(zhì)激素（adrenocorticotropic hormone，ACTH）的水平，評估大

4、鼠慢性睡眠紊亂模型建立的效果;HE染色法觀察大鼠TMJ的結(jié)構(gòu)變化;通過CD105免疫熒光法及毛細血管密度(microvessel density，MVD)計數(shù)法來評估大鼠顳下頜關(guān)節(jié)軟骨血管新生情況;應(yīng)用免疫組化、Western blot和RT-qPCR測定髁突軟骨VEGF, DII4和p-ERK1/2的表達水平。體外分離培養(yǎng)大鼠髁突軟骨細胞(mandibular condylarcartilage cells，MCC cells)，應(yīng)用

5、外源性VEGF和p-ERK1/2的特異性阻滯劑U0126對生長的髁突軟骨細胞進行干預(yù)，明確DII4和p-ERK1/2的表達有無相關(guān)。
　　結(jié)果:
　　我們應(yīng)用改良多平臺法成功地建立了大鼠慢性睡眠紊亂模型。CSD能夠引起大鼠血清中CORT和ACTH濃度升高。與CON組相比，CSD組大鼠的ACTH和血清CORT的表達量均出現(xiàn)明顯增加(p＜0.05)。
　　HE染色結(jié)果顯示，CON組大鼠TMJ結(jié)構(gòu)正常;而CSD組和R組大鼠的

6、TMJ均出現(xiàn)明顯的TMJ-OA病理改變。通過軟骨損害評分發(fā)現(xiàn):CSD組和R組得分明顯高于CON組(p＜0.01);同時與CON組相比，CSD組和R組出現(xiàn)軟骨損害的大鼠數(shù)量也顯著增加(p＜0.05)。
　　大鼠TMJ免疫熒光及HE染色結(jié)果顯示: CSD組和R組大鼠TMJ髁突骨軟骨交界及軟骨內(nèi)出現(xiàn)新生血管，有部分血管完全位于軟骨內(nèi)。CSD組及R組的MVD顯著高于CON組(p＜0.05)。
　　免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:CON組無或極

7、少出現(xiàn)免疫陽性結(jié)果，而CSD組和R組VEGF，DII4和p-ERK1/2均出現(xiàn)明顯免疫陽性結(jié)果。Western blot結(jié)果也表明:與CON組比較，CSD組和R組髁突軟骨VEGF，DII4和p-ERK1/2的蛋白表達均明顯升高;RT-qPCR結(jié)果證實:VEGF和DIl4的mRNA轉(zhuǎn)錄水平也都明顯升高(p＜0.05)。
　　細胞學(xué)實驗發(fā)現(xiàn)，髁突軟骨細胞中VEGF激活DIl4是依靠p-ERK1/2的活化來實現(xiàn)的。當(dāng)MCC細胞經(jīng)過U01

8、26處理后，Western blot檢測到p-ERK1/2表達被抑制，而DII4的表達水平也出現(xiàn)了相應(yīng)的降低。
　　結(jié)論:
　　本課題揭示了經(jīng)歷了長期的慢性睡眠紊亂大鼠的TMJ的病理變化，證實了CSD能夠引起大鼠出現(xiàn)TMJ-OA。髁突軟骨血管新生是TMJ-OA的發(fā)生發(fā)展的重要因素。同時髁突軟骨細胞中調(diào)控血管新生的關(guān)鍵因子VEGF, DII4和p-ERK1/2的表達水平上調(diào)， VEGF通過活化p-ERK1/2來上調(diào)Dll4的表