低頻脈沖電磁場對CRP作用下骨髓來源內皮祖細胞增殖、凋亡及一氧化氮分泌功能變化的影響.pdf

1、研究背景與目的：
　　新生血管形成是慢性缺血的重要代償方式，心肌缺血可以刺激血管再生及側枝循環(huán)的建立，恢復心肌的血液灌注。已有研究表明，在成人新生血管形成過程中，骨髓來源的內皮祖細胞的動員和分化起著非常重要的作用。而EPC的數量及功能與冠狀動脈疾病的危險因素呈副相關。作為危險因素之一的CRP，在冠心病時其血清濃度明顯升高，實驗證明，EPC與一定濃度的CRP共同孵育，可使EPC數量呈劑量依賴性減少。CRP可抑制EPC的分泌功能，明顯

2、降低EPC內皮一氧化氮合酶mRNA及表面標志物的表達，減少NO的釋放，從而抑制EPC的數量和功能，損害EPC介導的血管形成。
　　隨著高新技術的不斷發(fā)展，人們越來越多的暴露在低頻電磁場中，其生物學效應也越來越受到人們關注。大量的研究表明，低頻脈沖電磁場可促進人臍靜脈內皮細胞及牛主動脈內皮細胞的增殖，促進血管新生；刺激內皮細胞FGF、TGF-β等動脈形成主要促進因子的分泌。
　　本實驗擬探討在體外培養(yǎng)的條件下，不同強度及作用時

3、間的低頻脈沖電磁場對與有效濃度的CRP共培養(yǎng)的EPC增殖、凋亡及NO分泌變化的影響，明確有效磁場強度，為缺血性心臟病的治療探索新途徑。
　　方法：
　　第一部分：
　　EPC的分離培養(yǎng)及表型鑒定：1、取大鼠股骨骨髓，以密度梯度離心法分離出單核細胞，在添加了VEGF和bFGF的M199培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并定期觀察；2、DiI-ac-LDL和FITC-UEA-I免疫熒光雙染，鑒定細胞表型；
　　第二部分：
　　CR

4、P對EPC的影響：1、取培養(yǎng)4天的細胞，給與不同濃度的CRP干預3天，棄干預因素后繼續(xù)培養(yǎng)4天；2、MTT檢測其增殖能力；3、硝酸還原酶法檢測細胞的NO分泌能力。
　　低頻脈沖電磁場對12μg/mlCRP作用下EPC的影響：1、取培養(yǎng)4天的細胞，給與CRP及不同強度的低頻脈沖電磁場干預3天，棄干預因素后繼續(xù)培養(yǎng)4天；2、MTT檢測其增殖能力；3、硝酸還原酶法檢測細胞的NO分泌能力；4、流式細胞儀檢測凋亡率。
　　統(tǒng)計學分析：

5、數值均以x±s表示。數據應用SPSS13.0進行數據統(tǒng)計，所用統(tǒng)計方法為單因素方差分析，多重均數差異顯著性檢驗采用LSD-t檢驗。
　　結果：
　　1、細胞鑒定結果顯示DiI-ac-LDL和FITC-UEA-I雙染陽性，證實培養(yǎng)的細胞為內皮祖細胞。
　　2、與對照組相比，低濃度（4，8μg/ml）CRP干預72h對EPC的增殖、NO分泌能力的影響不顯著（P>0.05）。濃度≥12μg/mlCRP干預72h可明顯抑制EP

6、C的增殖與NO分泌（P<0.05），且隨著濃度的增加，抑制作用亦明顯增強，存在濃度依賴性（P<0.05）。
　　3、與單純CRP組（12μg/ml）相比，0.6mT8h，1.0mT2h磁場強度明顯促進與CRP共培養(yǎng)的EPC的增殖和NO分泌，抑制其凋亡率（P<0.05）；1.4mT8h磁場組與單純CRP組相比，抑制EPC的增殖，促進其凋亡，差異有統(tǒng)計學差異（P<0.05），對EPC的NO分泌能力沒有明顯的影響（P>0.05）。