慢性腎炎治療藥物組合庫的設(shè)計與合成.pdf

1、慢性腎炎是一類嚴重威脅人類健康的疾病，常導(dǎo)致腎功能衰竭而危及患者的生命。慢性腎炎的發(fā)生與免疫功能紊亂有關(guān)，屬于自身免疫性疾病。對其治療尚無特效藥物，目前臨床上常采用激素類藥物和免疫抑制藥物來治療，而激素類藥物和免疫抑制劑的長期使用有很大的副作用，因此尋找慢性腎炎新的治療藥物具有重要意義?，F(xiàn)代免疫學(xué)研究揭示，自身免疫性疾病的發(fā)生并不都是由于患者的免疫力過強，通常是由免疫紊亂引起，常常伴隨有免疫缺陷的發(fā)生。如能將失衡的免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)到正常，才

2、是對自身免疫病的標本兼治的方法。應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)劑治療自身免疫性疾病正成為研究熱點，文獻報道linomide是一個有效的免疫調(diào)節(jié)劑，在動物疾病模型上對慢性腎炎等多種自身免疫疾病都有療效，linomide的衍生物FR137316在小鼠慢性移植物抗宿主病(chronic-graft-versus-hostdisease，GVHD)和自身免疫MRL/1小鼠兩種腎炎模型均有較好的治療效果，和目前臨床上常用的治療慢性腎炎的激素藥物有類似的效果，F(xiàn)R1

3、37316是目前文獻報道的治療慢性腎炎最好的化合物。我們選擇Linomide和FR137316作為研究課題的先導(dǎo)物和陽性對照藥，設(shè)計并合成了具有自主知識產(chǎn)權(quán)的4-羥基-喹啉-3-酰胺類化合物庫，并在此基礎(chǔ)上進行了初步的生物活性篩選和構(gòu)效關(guān)系討論，以尋找高效低毒的慢性腎炎治療藥物。 主要的研究工作和結(jié)果如下：1.通過大量的文獻調(diào)研，選定免疫調(diào)節(jié)劑linomide作為本課題的先導(dǎo)化合物，根據(jù)已報道的linomide衍生物的構(gòu)效關(guān)系(

4、SAR)研究結(jié)果以及目標化合物的類藥性質(zhì)，包括了溶解性、穩(wěn)定性、毒性和滿足5倍律(ruleoffive)等方面的要求，結(jié)合文獻報道的免疫調(diào)節(jié)劑來氟米特(Leflunomide)和氯喹的結(jié)構(gòu)特點，設(shè)計了4-羥基-喹啉-3-酰胺類化合物庫，和先導(dǎo)化合物linomide最大的區(qū)別在于喹啉環(huán)2位沒有氧代，這就突破linomide的專利保護范圍，使我們設(shè)計的目標化合物具有自主的知識產(chǎn)權(quán)。 2.對庫化合物的合成路線進行了探索，找到了一條簡便

5、的合成路線，可以方便的在喹啉環(huán)和酰胺N上引入不同的取代基。庫化合物合成所需的兩種構(gòu)建單元為4-羥基-喹啉-3-羧酸乙酯類化合物和取代胺，所需的取代胺絕大部分可作為商品購買，4-羥基-喹啉-3-羧酸乙酯類化合物可通過兩步反應(yīng)方便制備。實踐證明該方法的反應(yīng)條件易于控制，產(chǎn)物的分離純化也較簡便，可用于同步合成，合成效率高。應(yīng)用該方法共合成4-羥基-喹啉-3-酰胺類化合物126個，均為新化合物，結(jié)構(gòu)未見文獻報道，已申請了發(fā)明專利(申請?zhí)?005

6、10063145.7)。 3.應(yīng)用1HNMR對全部的庫化合物進行了分析，應(yīng)用MS和元素分析法對部分庫化合物進行了分析，確證了庫化合物的結(jié)構(gòu)；應(yīng)用HPLC法隨機抽樣分析了13個化合物的純度，結(jié)構(gòu)表明合成的化合物的純度都在85％以上。 4.合成了兩個陽性對照藥linomide和FR137316三克，并經(jīng)1HNMR、MS和元素分析法確證了結(jié)構(gòu)，對linomide用HPLC法進行了純度分析，linomide的純度在99％以上。

7、 5.應(yīng)用脾淋巴細胞增殖反應(yīng)(3H-TdR摻入法)初步篩選了組合庫中84個化合物的免疫調(diào)節(jié)活性，其中有約50％的化合物和陽性對照藥有相似的免疫調(diào)節(jié)活性；應(yīng)用巨噬細胞分泌TNF-α實驗(ELISA)初步篩選了其中14個，有6個化合物和陽性對照藥有相似的活性，其中3個化合物(H0402、H0113和H1108)的活性高于陽性對照藥。初步結(jié)果表明我們設(shè)計的庫化合物的結(jié)構(gòu)具有合理性，先導(dǎo)化合物linomide結(jié)構(gòu)中喹啉環(huán)2位的氧代可能不是

8、免疫調(diào)節(jié)活性的必須基團。 6.對化合物的構(gòu)效關(guān)系進行了初步的分析，結(jié)果表明：1)在酰胺N原子上的取代基R4為脂肪族化合物時，免疫調(diào)節(jié)活性可以保留；2)在酰胺N原子上的取代基R3和R4構(gòu)成一個環(huán)狀化合物時，免疫調(diào)節(jié)活性顯著減弱；3)在喹啉環(huán)6位引入羧基時，對保留所需的免疫調(diào)節(jié)活性是不利的；4)在喹啉環(huán)6-8位上引入鹵素、甲基和甲硫基時，免疫調(diào)節(jié)活性仍可保留或是更強，如化合物H0113、H0402和H1108的活性高于陽性對照藥。這

9、些結(jié)果有助于進一步的藥效團分析，為設(shè)計新結(jié)構(gòu)類型的免疫調(diào)節(jié)劑提供依據(jù)。 本文在文獻研究的基礎(chǔ)上，設(shè)計并合成了一個包含126個化合物的組合庫，庫中所有化合物均為單一化合物，結(jié)構(gòu)未見文獻報道(已申請發(fā)明專利，申請?zhí)?00510063145.7)。應(yīng)用體外細胞實驗對庫化合物進行了初篩，結(jié)果表明約有半數(shù)的庫化合物保留了免疫調(diào)節(jié)活性，其中三個化合物H0113、H0402和H1108的活性高于陽性對照藥，有進一步研究的價值?；具_到了預(yù)期的