不同產(chǎn)地黃芪HPLC-DAD指紋圖譜及黃芪黃酮類成分譜效關(guān)系研究.pdf

1、目的：采用HPLC法建立不同產(chǎn)地黃芪指紋圖譜，對(duì)黃芪黃酮類成分（Astragalus flavonoids，AFS）進(jìn)行譜效關(guān)系研究，確定各色譜峰代表的化學(xué)成分信息與耐缺氧、抗炎功效的關(guān)聯(lián)程度，為黃芪多種有效成分的確定提供趨勢(shì)預(yù)測(cè)和科學(xué)數(shù)據(jù)，為黃芪質(zhì)量控制全面提升奠定基礎(chǔ)。
　　方法：（1）采用HPLC/DAD法對(duì)12批次不同地產(chǎn)黃芪藥材供試品進(jìn)行分析，進(jìn)一步優(yōu)化色譜條件（洗脫梯度）并完成了系統(tǒng)的方法學(xué)考察，建立黃芪藥材指紋圖譜。

2、運(yùn)用“中藥色譜指紋圖譜相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件”，進(jìn)行黃芪指紋圖譜相似性評(píng)價(jià)。（2）通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂分別對(duì)六個(gè)不同地產(chǎn)黃芪（寧夏隆德縣、寧夏彭陽(yáng)縣、寧夏固原市原州區(qū)、寧夏吳忠市紅寺堡區(qū)、甘肅岷縣麻子川鄉(xiāng)、甘肅岷縣梅鄉(xiāng)鎮(zhèn)）的黃酮類成分進(jìn)行富集，得到不同產(chǎn)地黃芪藥材黃酮類成分富集部位。（3）富集部位藥效研究：以二甲苯致小鼠耳腫脹法測(cè)定耳腫脹度和腫脹抑制率來(lái)評(píng)價(jià)黃芪黃酮類成分抗炎作用；以小鼠耐缺氧實(shí)驗(yàn)記錄延長(zhǎng)存活時(shí)間來(lái)評(píng)價(jià)黃芪耐缺氧功效。（4）運(yùn)用

3、灰色關(guān)聯(lián)分析法研究黃芪藥材黃酮類成分富集部位指紋圖譜特征峰所代表的化學(xué)成分信息與補(bǔ)氣、抗炎藥效的關(guān)系，最終根據(jù)關(guān)聯(lián)度大小來(lái)確定指紋圖譜特征峰所代表的化學(xué)成分對(duì)其藥效作用貢獻(xiàn)程度。
　　結(jié)果：（1）通過(guò)“中藥色譜指紋圖譜相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件”，標(biāo)定出15個(gè)共有峰且以中位數(shù)法建立對(duì)照指紋圖譜，計(jì)算出待測(cè)指紋圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜的整體相似度。即12批次不同地產(chǎn)的黃芪藥材指紋圖譜相似度分別是：趙樓村0.850；聯(lián)財(cái)村0.966；聯(lián)財(cái)北山0.946

4、；陽(yáng)坪村0.884；堿井村0.980；新民村0.978；康鮮種植基地0.987；開(kāi)城梁0.951；沙塘鐵虛溝0.920；清涼村0.901；城陽(yáng)鄉(xiāng)0.905；甘肅隴西0.858。（2）6個(gè)產(chǎn)地的黃芪藥材經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂富集得其黃酮類成分浸膏，分別為隆德縣5.92 g、彭陽(yáng)縣4.99、原州區(qū)6.21、紅寺堡區(qū)5.66g、甘肅麻子川鄉(xiāng)4.84 g、甘肅梅鄉(xiāng)鎮(zhèn)5.63 g，浸膏得率分別是11.84％、9.98%、12.42%、11.32%、9.6

5、8%、11.26%。HPLC法測(cè)定黃芪藥材富集后指紋圖譜，38min后無(wú)明顯的吸收峰出現(xiàn)。（3）在二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)中，與模型組比較，隆德縣、彭陽(yáng)縣、原州區(qū)、紅寺堡區(qū)、甘肅麻子川鄉(xiāng)、甘肅梅鄉(xiāng)鎮(zhèn)6個(gè)不同地產(chǎn)黃芪富集得到的黃酮類物質(zhì)有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）均有一定抗炎活性；在小鼠耐缺氧實(shí)驗(yàn)中，與空白對(duì)照組比較，隆德縣、彭陽(yáng)縣、原州區(qū)、紅寺堡區(qū)、甘肅麻子川鄉(xiāng)、甘肅梅鄉(xiāng)鎮(zhèn)6個(gè)不同地產(chǎn)黃芪黃酮類物質(zhì)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），可有效

6、延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間。（4）對(duì)指紋圖譜及藥效學(xué)采用灰色關(guān)聯(lián)分析法處理，結(jié)果如下：①15個(gè)共有特征峰與抗炎作用的關(guān)聯(lián)度均大于0.6，說(shuō)明黃芪富集部位的藥效作用是所有化學(xué)成分共同作用的結(jié)果，且關(guān)聯(lián)度大于0.92的物質(zhì)的順序?yàn)榇堂⒈ㄜ?保留時(shí)間為21.6 min的物質(zhì)>毛蕊異黃酮苷，在黃芪黃酮類成分中刺芒柄花苷與其抗炎作用的關(guān)聯(lián)度最大；②15個(gè)共有特征峰與耐缺氧功效的關(guān)聯(lián)度均大于0.6，說(shuō)明黃芪富集部得位的藥效作用是所有化學(xué)成分共同作用的結(jié)果，

7、關(guān)聯(lián)度大于0.92的物質(zhì)的順序?yàn)榇堂⒈ㄜ?毛蕊異黃酮苷>保留時(shí)間為21.6 min的物質(zhì)，在黃芪黃酮類成分中刺芒柄花苷與耐缺氧作用的關(guān)聯(lián)度最大，其次是毛蕊異黃酮苷。
　　結(jié)論：（1）建立12批次不同地產(chǎn)黃芪HPLC指紋圖譜并進(jìn)行方法學(xué)考察和黃芪指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)，該方法簡(jiǎn)便易行，結(jié)果可靠；（2）通過(guò)D101大孔吸附樹(shù)脂柱層析能有效地對(duì)黃芪黃酮類成分富集；（3）藥效學(xué)試驗(yàn)表明，不同地產(chǎn)黃芪富集后得到的黃酮類成分均具有不同程度的抗炎