神經(jīng)干細(xì)胞移植治療脊髓損傷大鼠的實驗研究.pdf

1、目的：探討胎鼠腦源性神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)移植對脊髓損傷大鼠的神經(jīng)功能的修復(fù)作用。 方法：取孕13～15天SD大鼠胚胎的腦組織分離NSCs，在體外培養(yǎng)并鑒定。制作脊髓損傷(SCI)大鼠模型，傷后7天將BrdU標(biāo)記好的NSCs局部移植在損傷脊髓處。SCI大鼠分為三組：A組，損傷組，SCI后自然恢復(fù)；B組，N.S移植組，SCI后7天局部移植10μL生理鹽水；C組，NSCs移植組，SCI后7天局部移植10μLNSCs懸液(約1.0×1

2、06)。A.B.C三組損傷前及傷后6天、14天、21天、30天、60天時分別行后肢BBB行為學(xué)評分和軀體感覺誘發(fā)電位(SEP)、運動誘發(fā)電位(MEP)檢測，傷后60天處死實驗動物行病理學(xué)檢查及免疫組織化學(xué)染色，觀察移植NSCs在大鼠體內(nèi)的存活、遷移及分化情況。 結(jié)果： 1.胚胎大鼠腦源性的NSCs可以在體外分離、培養(yǎng)及傳代，體外培養(yǎng)的細(xì)胞nestin免疫熒光染色陽性，證實是NSCs。 2.后肢BBB運動功能評分：

3、SCI后6天，A.B.C三組各組行為學(xué)評分無顯著差異(P>0.05)；傷后14天，A組行為學(xué)評分高于B.C兩組(P<0.05)，B組和C組比較無顯著差異(P>0.05)；傷后21天，A組和C組行為學(xué)評分高于B組(P<0.05)，A組和C組比較無顯著差異(P>0.05)；傷后30天，C組行為學(xué)評分最高，其次A組，B組最差，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；傷后60天，結(jié)果與傷后30天一致。表明NSCs移植組的行為學(xué)評分比其它兩組有顯著改善。

4、 3.SEP檢測：損傷前A.B.C三組SEP波潛伏期正常，各組比較無顯著差異(P>0.05)；損傷后6天，各組SEP波均消失；傷后14天、21天、30天，各組SEP波逐漸恢復(fù)，但潛伏期延長；傷后60天，各組SEP波均出現(xiàn)，A組和B組的潛伏期比C組延長(P<0.05)，A組和B組比較無顯著差異(P>0.05)，各組分別與損傷前相比，潛伏期均延長(P<0.05)。表明NSCs移植組的神經(jīng)傳導(dǎo)功能比其它兩組恢復(fù)的好。 4.MEP

5、檢測：損傷前A.B.C三組MEP潛伏期正常，各組比較無顯著差異(P>0.05)；損傷后6天，各組MEP波均消失；傷后14天、21天、30天，各組MEP波逐漸恢復(fù)，但潛伏期延長；傷后60天，各組MEP波均出現(xiàn)，B組潛伏期最長，其次A組，C組最短(P<0.05)；各組分別與損傷前相比，潛伏期均延長(P<0.05)。表明NSCs移植組的神經(jīng)傳導(dǎo)功能比其它兩組恢復(fù)的好。 5.病理學(xué)和免疫組化雙染發(fā)現(xiàn)，C組脊髓內(nèi)可見BrdU染色陽性的細(xì)胞

6、，表明NSCs可在宿主體內(nèi)存活；在距離脊髓損傷中心1.5cm處可見BrdU染色陽性的細(xì)胞，表明NSCs在宿主脊髓內(nèi)有遷移功能；C組脊髓損傷處發(fā)現(xiàn)BrdU+NSE、BrdU+GFAP免疫組化雙染陽性細(xì)胞，表明NSCs在宿主體內(nèi)可以分化為神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞。 結(jié)論：胚胎大鼠腦源性的NSCs可以在體外分離、培養(yǎng)及鑒定。NSCs移植入SCI大鼠體內(nèi)可以存活、遷移，并分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。NSCs移植可以促進SCI大鼠的神經(jīng)功能的