神經干細胞移植治療視神經損傷的實驗研究.pdf

1、中南大學博士學位論文神經干細胞移植治療視神經損傷的實驗研究姓名：柳浩然申請學位級別：博士專業(yè)：外科學指導教師：方加勝20060501博：I：學位論文中文摘要以期為基礎及臨床應用研究提供詳細的實驗數據。研究包括以下四個部分。第一部分神經干細胞的分離、培養(yǎng)與鑒定目的分離神經干細胞(NSCs)，體外培養(yǎng)傳代，誘導其分化并進行鑒定，為應用研究奠定基礎。方法從胚胎大鼠的大腦皮層、室管膜下區(qū)和海馬等部位分離NSCs，用無血清培養(yǎng)技術體外培養(yǎng)、擴增、

2、傳代，去除生長因子后誘導NSCs分化，采用免疫熒光技術對NSCs及分化的神經細胞進行鑒定。同時在體外長期培養(yǎng)，建立簡單方便的NSCs傳代培養(yǎng)技術。結果從胚胎大鼠的大腦皮層、室管膜下區(qū)和海馬組織可獲得大量的NSCs，這些細胞在培養(yǎng)基中自我增殖并分化表達神經元、星形膠質細胞和少突膠質細胞的特異性抗原NeuN、GFAP和MBP。反復傳代后這些細胞仍可保持自我增殖及多向分化的潛能。結論胚鼠的NSCs具有自我更新和增殖能力，并具備多向分化潛能，可

3、分化為神經元、星形膠質細胞和少突膠質細胞。體外長期傳代培養(yǎng)可保持NSCs的基本特性。第二部分神經干細胞在視網膜內的存活、整合和分化目的觀察神經干細胞(NSCs)移植后在視神經損傷大鼠視網膜內的存活、整合和分化情況。方法48只健康成年SD大鼠隨機分為A組(視神經損傷組)和B組(對照組)，每組24只，A組使用精確校準方法在大鼠右眼造成部分視神經損傷，隨后手術顯微鏡下，利用體內移植技術，將培養(yǎng)好的NSCs注入右眼玻璃體下腔內；B組正常大鼠，正