褪黑素以及人工氧載體對(duì)腫瘤血管新生的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：(1)觀察褪黑素(MEL)對(duì)體外培養(yǎng)的人肺癌細(xì)胞(A549)、胰腺癌細(xì)胞(PANC-1)以及宮頸癌細(xì)胞(HeLa)的影響。(2)觀察氯化鈷(CoCl2)對(duì)A549、PANC-1以及HeLa細(xì)胞存活狀況的影響。(3)研究MEL在常氧狀態(tài)下對(duì)A549、PANC-1以及HeLa細(xì)胞中VEGF表達(dá)的影響。(4)研究MEL在CoCl2模擬的低氧狀態(tài)下對(duì)A549、PANC-1以及HeLa細(xì)胞中VEGF表達(dá)的影響。(5)進(jìn)一步研究MEL對(duì)三種腫

2、瘤細(xì)胞中VEGF表達(dá)的調(diào)控機(jī)制以及信號(hào)傳導(dǎo)途徑。 方法：(1)體外培養(yǎng)A549、PANC-1以及HeLa細(xì)胞。應(yīng)用MTT法檢測(cè)MEL對(duì)腫瘤細(xì)胞存活、增殖及凋亡的影響。(2)應(yīng)用MTT法檢測(cè)CoCl2對(duì)體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞存活、增殖及凋亡的影響。(3)RT-PCR檢測(cè)在常氧和CoCl2模擬的低氧狀態(tài)下，MEL與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)以后，腫瘤細(xì)胞中VEGF mRNA的表達(dá)水平。(4)WesternBlot檢測(cè)常氧和CoCl2模擬的低氧狀態(tài)下

3、，MEL與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后，腫瘤細(xì)胞中VEGF和HIF-lα蛋白的表達(dá)。(5)ELISA檢測(cè)MEL作用以及MEL與COCl2共同作用24h后，腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液中VEGF的含量。 結(jié)果：(1)0～150μmol/L CoCl2不影響腫瘤細(xì)胞的增殖活性，加大濃度后會(huì)明顯減少活細(xì)胞數(shù)量：250～500μmol/L的CoCl2可以引起腫瘤細(xì)胞的少量凋亡。(2)在3種腫瘤細(xì)胞中，CoCl2都可以模擬低氧狀態(tài)，抑制HIF-1α降解，誘導(dǎo)VEG

4、F表達(dá)升高。(3)生理濃度MEL(1nmol/L)對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖無(wú)明顯影響，但藥理濃度MEL(1mmol/L)明顯抑制3種腫瘤細(xì)胞增殖，并具有濃度依賴傾向。(4)生理濃度MEL(1nmol/L)對(duì)腫瘤細(xì)胞VEGF基礎(chǔ)表達(dá)水平以及CoCl2誘導(dǎo)的HIF-1α以及VEGF表達(dá)水平無(wú)明顯影響。(5)藥理濃度MEL(1mmol/L)明顯抑制CoCl2誘導(dǎo)的HIF-1α以及VEGF的表達(dá)。 結(jié)論：(1)100μmol/LCoCl2對(duì)腫瘤細(xì)