高效氯氰菊酯抗雄激素效應及機制研究.pdf

1、高效氯氰菊酯(β-cyp)屬于擬除蟲菊酯類農(nóng)藥,現(xiàn)被廣泛使用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。動物研究表明該農(nóng)藥對精子數(shù)量、形態(tài)和運動能力有損傷作用,人群資料也進一步顯示其對男性生殖系統(tǒng)存在潛在性危害。高效氯氰菊酯是重要的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物,其致雄(男)性生殖毒性的毒作用機制較為復雜,可能與雄激素受體(AR)介導的信號通路有關。受體報告基因?qū)嶒炓卜Q受體轉(zhuǎn)錄激活試驗,是EPA推薦的用于環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(EDCs)篩選的in vitro方法之一。研究表明,這種方

2、法即可檢測化學物與受體結(jié)合的能力,又可檢測結(jié)合后引起的生物學效應,而且能夠區(qū)分激動劑和拮抗劑,與受體結(jié)合試驗相比可提供更多的信息,因此成為EDCs篩選的有力工具。本研究將動物實驗和受體報告基因試驗結(jié)合,闡明β-cyp的抗雄激素效應及其作用機制,為揭示擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的抗雄激素效應機制提供重要依據(jù),并為其他化學物質(zhì)的研究提供新的思路和技術平臺。
　　 第一部分高效氯氰菊酯對成年雄性大鼠生殖系統(tǒng)的影響
　　 目的:選擇高效氯

3、氰菊酯(β-cyp)為研究對象,研究其對雄性生殖系統(tǒng)的損傷作用及機制。
　　 方法:選擇成年雄性嚙齒類動物15天染毒試驗,按體重將30只成年雄性SD大鼠隨機分為中、低劑量和對照共三組,每組10只。中、低劑量組灌胃量分別按30 mg和15 mgβ-cyp/kg BW灌胃15天,對照組則每天給與同體積玉米油。15天后稱大鼠終重并處死,將睪丸、附睪和精囊取出分別稱重。一側(cè)睪丸用于精子頭計數(shù)實驗,另一側(cè)睪九通過對其做免疫組化實驗來觀測雄

4、激素受體(AR)的表達。
　　 結(jié)果:與對照組相比,給藥組的精子頭計數(shù)和每日精子生成量明顯減少,且AR水平也顯著降低,三個組的灰度值分別為113.79±13.58、96.09±5.95和77.27±5.44,差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論:β-cyp對雄性生殖系統(tǒng)是有損傷作用的,抑制AR的表達可能是其引起精子數(shù)下降的重要機制之一。
　　 第二部分高效氯氰菊酯的雄激素受體報告基因試驗研究
　　 目的:通過A

5、R報告基因試驗檢測β-cyp是否是AR拮抗劑。
　　 方法:建立以氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)為報告基因的雄激素受體(AR)報告基因試驗。將表達AR的質(zhì)粒AR/pcDNA3.1、重組報告基因質(zhì)粒pMMTV-CAT和陽性對照質(zhì)粒pSV-β-Gal共轉(zhuǎn)染非洲猴腎細胞株CV-1,以5α-雙氫爭酮(5α-DHT)為陽性對照。CV-1轉(zhuǎn)染后用高效氯氰菊酯(β-cyp)染毒,通過檢測該物質(zhì)作用下CAT的蛋白表達水平,間接反應內(nèi)源性基因的表達情