β—氯氰菊酯影響雄性小鼠生殖功能作用機(jī)制研究.pdf

1、氯氰菊酯是一類廣泛使用的農(nóng)藥，由于具有高效低毒的特性，廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)和獸醫(yī)實(shí)踐。β-氯氰菊酯是由α-氯氰菊酯和θ-氯氰菊酯構(gòu)成的混合物，其活性低于α-氯氰菊酯，但高于其他類型的氯氰菊酯。為了闡明氯氰菊酯對(duì)雄性生殖功能的影響，本研究以β-氯氰菊酯為試驗(yàn)藥物，以成年公鼠(30-35g)為實(shí)驗(yàn)材料，通過(guò)灌喂方式給藥，進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)。首先確定其半數(shù)致死量(LD50)為61.12mg/kg。在此基礎(chǔ)上將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成6組，每組10只，具體方案

2、如下：Ⅰ組(0mg/kgwt．dβ-CP)，Ⅱ組(1mg/kgwt．d β-CP)，Ⅲ組(10mg/kgwt．d β—CP)，Ⅳ組(20mg/kgwtd β-CP),Ⅴ組(20mg/kgwt．d β—CP+15mg/kgwt．d VE)．Ⅵ組(0mg/kgwt．d β-CP 15mg/kgwt．d VE)連續(xù)灌胃35日。 用藥后最初兩天，各組小鼠均表現(xiàn)出食欲下降，飲水減少和精神沉郁、嗜睡。7天后，第Ⅰ組恢復(fù)正常狀態(tài)，第Ⅱ組和第Ⅲ

3、組朱表現(xiàn)出明顯癥狀，第Ⅳ組表現(xiàn)為持續(xù)的沉郁和無(wú)活力狀態(tài)，并偶然伴隨有神經(jīng)抽搐。 除了表現(xiàn)出一定的臨床表現(xiàn)外，小鼠血清中睪酮的水平也發(fā)生了變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，β-CP濃度為1mg/kgwt．d時(shí)對(duì)血清睪酮濃度沒(méi)有產(chǎn)生明顯的影響(P>0.05)；當(dāng)β-CP濃度進(jìn)一步升高時(shí)，血清睪酮的含量則顯著下降(P<0.05)。添加VIE可以有效抑制β-CP對(duì)血清睪酮濃度的影響(P<0.05)。為了進(jìn)一步研究β-CP對(duì)睪酮合成的影響，我們也檢測(cè)了

4、類固醇合成快速調(diào)節(jié)蛋白(StAR蛋白)表達(dá)的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在低濃度時(shí),β-CP對(duì)StAR蛋白的表達(dá)沒(méi)有明顯的影響，隨著濃度的增加，β-CP抑制了StAR蛋白的表達(dá)，添加VE可以削弱β-CP對(duì)StAR蛋白表達(dá)的抑制作用。 不同濃度的β-CP使挈丸重量發(fā)生了不同程度的減小，第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ三組小鼠的睪丸在重量減輕的同時(shí)出現(xiàn)血管充血現(xiàn)象、不同發(fā)育階段精母細(xì)胞出現(xiàn)腫脹、細(xì)胞脫落、曲精細(xì)管空泡化、曲精細(xì)管之問(wèn)的結(jié)締組織增生、精子數(shù)量減少。其中

5、，第Ⅲ組，第Ⅳ組的睪丸重鍍與第Ⅰ組相比，發(fā)生顯著的減少(aP<0.05)．添加VE可以緩解這種影響(bP<0.05)．但仍然與VE單獨(dú)存在的狀態(tài)有顯著差異(aP<0.05)。進(jìn)一步檢測(cè)睪丸問(wèn)質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化結(jié)果發(fā)現(xiàn)，所有濃度的β-CP對(duì)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)均有影響．間質(zhì)細(xì)胞的線粒體和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)均出現(xiàn)輕微的腫脹，核膜周隙不清。伴隨濃度的增高，大量的滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹變性，線粒體腫脹，透明化，而第Ⅳ組細(xì)胞中大量滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形成同心圓狀結(jié)

6、構(gòu)。間質(zhì)細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)的變化是睪酮合成減少StAR蛋白的表達(dá)下降的直接原因。研究體內(nèi)氧化應(yīng)激和抗氧化能力結(jié)果發(fā)現(xiàn)，低濃度的β-CP(1mg/kgwt．d)可以提高M(jìn)DA的表達(dá)水平：而在較高濃度組，β-CP不僅可以提高M(jìn)DA的水平，NO的水平也發(fā)生顯著的升高(P<0.05)：VE可以有效的削弱這種影響(P<0.05)。β-CP主要通過(guò)增強(qiáng)iNOS的作用提高NO的水平。研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，隨著β-CP濃度的增加，CAT，GSH-Px，SOD，TA

7、OC均山現(xiàn)卜降．這種變化在第Ⅲ組、第Ⅳ組表現(xiàn)的尤為顯著(P<0.05)。 檢測(cè)MAPK活性的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，磷酸化的ERKl和ERK2的表達(dá)水平隨著β-CP濃度的升高而升高，而添加VE，可以有效的抑制β-CP所產(chǎn)生的這種影響。 綜上所述．可以得到以下結(jié)論： (1)較高濃度的β-CP破壞睪丸的組織結(jié)構(gòu)和間質(zhì)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)： (2)較高濃度的β-CP通過(guò)引起體內(nèi)氧化應(yīng)激，引起MDA、NO、TNOS、iNOS水