PAX2基因多態(tài)性和蛋白表達(dá)與小兒過敏性紫癜相關(guān)性研究.pdf

1、目的： 1.研究成對盒-2(Palred Box-2，PAX2)基因多態(tài)性在健康人群與過敏性紫癜(Henoch-schonlein purpura，HSP)患者的分布頻率及特點； 2.探討PAX2基因多態(tài)性與HSP易感性的關(guān)系，并進(jìn)一步分析基因多態(tài)性與HSP不同臨床表型、紫癜性腎炎(Henoch-schonlein purpuranephritis，HSPN)患兒腎臟病理特征之間的相關(guān)性； 3.研究PAX2蛋白在

2、不同臨床表現(xiàn)、不同病理嚴(yán)重程度的HSPN腎組織中的表達(dá)水平及其差異，并探討PAX2不同基因型患兒 PAX2蛋白表達(dá)的差異。 材料與方法： 本研究第一部分共納入健康對照者100例，HSP患者118例(其中HSPN患兒80例、HSP無腎損害患兒38例)。自周圍靜脈血標(biāo)本提取DNA，應(yīng)用PCR、DHPLC及直接測序的方法檢測健康者及HSP患者PAX2基因型，應(yīng)用病例一對照研究方法探討PAX2基因多態(tài)性與HSP易感性及臨床和腎臟

3、病理的關(guān)系。本研究第二部分以64例腎組織病理資料完善的HSPN患兒為研究對象，應(yīng)用PAX2多克隆抗體，應(yīng)用免疫組化法檢測病變腎組織中PAX2蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1.PAX2基因外顯子(exon)1-7，9，10，12無單核苷酸多態(tài)性，exon8處2種SNP呈緊密連鎖的單倍型(798C>T+909A>C)，exonll存在SNP為1164 T>A。798C/909A和798T/909C等位基因頻率在對照組分別為93％

4、和7％，在HSP組中的分別為89.41％和10.59％，兩組間798C/909A和798T/909C等位基因分布頻率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(x2=2.506，p=0.113)。PA)(2等位基因798CC/909AA，798CT/909AC和798TT/909CC在對照組分別為87.0096，12.00％，1.00％，在HSP組分別為79.66％，19.49％，0.85％；兩組間各基因型分布頻率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（p=0.198)。11

5、64 T和1164A等位基因頻率在對照組分別為99.5％和0.5％，在liSP組中的分別為99.15％和0.85％，兩組間1164 T和1164A等位基因分布頻率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(x2=O.091，p：0.662)。PAX2等位基因1164TT，1 164T^和l 164AA在對照組分別為99.00％，1.00％，0，在HSP組分別為98.31％，1.69％，0；兩組間各基因型分布頻率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.661)。

6、 2.HSP患者中，由PAX2 exon8多態(tài)性所致不同基因型分布與患者的性別、年齡、關(guān)節(jié)受累、胃腸道癥狀等均無明顯關(guān)系(p>0.05)，而在腎臟損害臨床表型方面，PAX2基因exon-8-798CT/909AC雜合基因型出現(xiàn)頻率顯著增高(p=0.039)。 3.在HSPN組，798CC/909AA，798CT/909AC和798TT/909CC基因型頻率分別為75％，25％，0。與正常對照組及HSP無腎損害組相比，雜合子基因型

7、798CT/909AC頻率顯著性增加(p<0.05)。HSPN患兒不同臨床表型之間PAX2基因型頻率分布無顯著性差異(p>0.05)。 4.HSPN組腎組織中存在不同程度PAX2再表達(dá)，其中遠(yuǎn)端小管表達(dá)明顯高于近端小管和足細(xì)胞(p<0.05)，足細(xì)胞表達(dá)較微弱，集合管表達(dá)不明顯。正常腎臟未見PAX2表達(dá)。 5.相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，腎小球足細(xì)胞PAX2蛋白表達(dá)積分與腎小球病理積分呈正相關(guān)(p<0.05)，與尿沉渣紅細(xì)胞計數(shù)呈負(fù)相

8、關(guān)(p<0.05)；遠(yuǎn)端小管PAX2蛋白表達(dá)積分與尿沉渣紅細(xì)胞計數(shù)呈正相關(guān)(p<0.05)，與24小時尿蛋白定量呈負(fù)相關(guān)(p<0.05)；近端小管PAX2蛋白表達(dá)積分與腎小管病理積分呈正相關(guān)(p<0.05)，與24小時尿蛋自定量呈負(fù)相關(guān)(p<0.05)；壁層上皮細(xì)胞PAX2表達(dá)陽性者，腎小球病理積分明顯增加(p<0.05)。 6.攜帶798CT/909AC基因型的患兒，在近端小管和遠(yuǎn)端小管部位，PAX2表達(dá)積分較攜帶798CC/

9、909AA基因型者顯著增高(p<0.05)，24小時尿蛋白定量亦明顯增加(p<0.05)。 結(jié)論 ： 1.漢族兒童PAX2基因exonl-7，9，10，12無單核苷酸多態(tài)性，exon8處2種SNPs呈緊密連鎖的單倍型(798C>T+909A>C)。首次發(fā)現(xiàn)漢族兒童exonll存在低頻率SNP，為1164 T>A，突變頻率約為0.5％。 2.PAX2基因exon8-798CT/909AC基因型不增加HSP發(fā)生的易感

10、性，但增加HSP中腎臟受累的易感性，而與腎臟受累臨床表型和病理的嚴(yán)重程度無明顯關(guān)聯(lián)。 3.HSPN腎組織中存在PAX2蛋白回歸表達(dá)，以腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)為主，腎小球區(qū)表達(dá)明顯較腎小管為弱。 4.PAX2基因exon8-798CT外顯子個體腎小管上皮細(xì)胞PAX2蛋白表達(dá)顯著高于exon8--798CC外顯子的個體。 5.PAX2基因exon8-798CT外顯子個體與exon8-798CC外顯子個體相比，臨床表現(xiàn)為較