PPARγ及配體對早孕期細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤能力的影響及機(jī)制研究.pdf

1、本文研究目的：通過檢測PPAγ、MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白在早孕6-8W和11-12W胎盤中的定位和表達(dá)，探討其與細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤的關(guān)系；PPARγ激動配體15-d-PGJ2和Troglitazone及拮抗配體BADGE對培養(yǎng)的早孕早期和早孕晚期細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤能力的影響；在培養(yǎng)的早孕細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞中PPARγ激動配體15-d-PGJ2和Troglitazone對MMP-2和MMP-9的表達(dá)調(diào)控作用；進(jìn)一步明確PPARr與滋養(yǎng)

2、細(xì)胞浸潤的關(guān)系及其作用機(jī)制，為PPARγ配體藥物最終應(yīng)用于臨床提供理論和實驗依據(jù)。 研究方法： 通過免疫組織化學(xué)、RealTime RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測早孕絨毛組織中PPARγ、MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白的表達(dá)；利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)分離早孕絨毛細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行原代無血清培養(yǎng)，并通過免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、體外浸潤實驗和掃描電鏡技術(shù)觀察和檢測培養(yǎng)的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞中PPARγ的表達(dá)及其配體對細(xì)胞

3、滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤能力的影響；通過免疫熒光共聚焦技術(shù)、Real Time RT-PCR和Westem blot技術(shù)觀察和檢測PPARγ配體對體外培養(yǎng)的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞表達(dá)MMP-2和MMP-9的調(diào)控作用。 研究結(jié)果： 1、PPARγ蛋白主要定位在早孕絨毛細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞核及絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞柱和細(xì)胞島的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞核內(nèi)，MMP-2和MMP-9陽性顆粒主要存在絨毛細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞和合體細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞胞漿內(nèi)，絨毛間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)亦有陽性染色，且早孕6-8

4、W絨毛。PPARγ表達(dá)量高于11-12W(P<0.05)，而MMP-2和MMP-9表達(dá)量在孕11-12W高于6-8w(P<0.05)，與PPAR7呈負(fù)相關(guān)； 2、體外無血清培養(yǎng)的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞PPARγ蛋白亦呈陽性表達(dá)，綠色陽性信號主要定位在細(xì)胞核中；PPARγ天然激動劑15-d-PGJ2和合成激動劑Trogiitazone使用濃度為0.1、1和10μmol/L，培養(yǎng)48h后兩種激動劑均抑制滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤，呈濃度依賴關(guān)系，且15-d

5、-PGJ2作用強(qiáng)于Trogiitazone，當(dāng)15-d-PGJ2濃度為1和10μmol/L，Troglitazone濃度為10μmol/L時對細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤的抑制作用與對照相比具有顯著性差異(P<0.05)，且兩種激動劑對6-8W細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的抑制作用強(qiáng)于11-12w，差異均有顯著性(P<0.05)；PPARγ拮抗劑BADGE使用濃度為0、20、50μmol/L，結(jié)果顯示，可劑量依賴性地促進(jìn)細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤，在50μmol/L可使6-

6、8W細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤能力增加約二分之一倍，而且BADGE可不同程度地拮抗激動劑對滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤的抑制作用，當(dāng)BADGE(50μmol/L)與15-d-PGJ2(10μmol/L)聯(lián)合培養(yǎng)時細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤能力比單獨(dú)15-d-PGJ2(10μmol/L)培養(yǎng)時明顯增強(qiáng)，差異具有顯著性(P<0.05)。當(dāng)BADGE(50μmol/L)和Trogiitazone(10μmol/L)聯(lián)合培養(yǎng)與單獨(dú)Troglitazone(10μmol/L)培養(yǎng)時

7、細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤能力雖增加，但無顯著性差異(P>0.05)。 3、離體培養(yǎng)的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)不同濃度的PPARγ配體15-d-PGJ2和Troglitazone作用48小時后檢測發(fā)現(xiàn)，隨著藥物濃度的增加MMP-2和MMP-9mRNA和蛋白的表達(dá)強(qiáng)度依次下降，呈現(xiàn)濃度依賴趨勢。當(dāng)15．d．PGJ2濃度為0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L，Troglitazone濃度為1μmol/L和10μmol/L時，MMP-2和

8、MMP-9 mRNA和蛋白表達(dá)強(qiáng)度明顯下降，與對照組相比差異顯著(P<0.05)。15-d-PGJ2對細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞下調(diào)MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表達(dá)的作用明顯強(qiáng)于Troglitazone，差異具有顯著性(P<0.05) 研究結(jié)論： 1、在早孕胎盤組織中均表達(dá)PPAγ、MMP-2和MMP-9，從早孕6-8W到11-12W隨滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤能力的增加PPARγ表達(dá)逐漸下降，MMP-2和MMP-9的表達(dá)逐漸增加，PPA

9、Rγ與MMP-2和MMP-9之間呈負(fù)相關(guān)，且在6-8W組MMP-2表達(dá)量多于MMP-9，而11-12W則MMP-9多于MMP-2，但無顯著性差異。 2、PPARγ天然激動配體15-d-PGJ2和合成激動配體Troglitazone均可抑制細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的浸潤，且15-d-PGJ2的抑制作用強(qiáng)于Troglitazone；兩種激動劑對6-8W細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的抑制作用強(qiáng)于11-12W；PPARγ拮抗配體BADGE可促進(jìn)細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤，且