PPARγ特異配體羅格列酮對肝星狀細胞MMPs、TIMPs及膠原表達影響.pdf

1、目的：肝纖維化是多種慢性肝損傷的共同后果，進一步則發(fā)展為肝硬化甚至肝癌，是一類世界性的嚴重危害人們健康的主要疾病。現(xiàn)已知肝纖維化是一個可逆性病變，而肝硬化是不可逆的?；罨母涡菭罴毎╤epatic stellate cell，HSC）是肝纖維化發(fā)生的核心環(huán)節(jié)?；罨腍SC通過旁分泌與自分泌作用合成分泌多種細胞外基質（extracellular matrixes，ECM），同時合成、釋放大量基質金屬蛋白酶組織抑制物（tissue inh

2、ibitors of metalloproteinases，TIMPs），抑制膠原酶、明膠酶等基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）活性，減少ECM降解，導致ECM合成大于降解，最終過量積聚在肝內形成肝纖維化。過氧化物酶體增殖物活化受體γ（peroxisome proliferators-activated receptor gamma，PPARγ）是一種配體激活的核受體轉錄因子，與肝纖維化之間關

3、系的研究主要集中于PPARγ與HSC激活之間的關系上。研究證實，靜止狀態(tài)HSC表達PPARγ，而活動狀態(tài)的HSC表達PPAR7明顯減少，PPARγ在維持HSC作為靜止狀態(tài)的表型上具有重要作用，PPARγ表達減少與HSC激活密切相關。PPARγ及其配體在肝纖維化形成中的作用已成為肝纖維化研究領域里的一個新熱點，但其具體機制尚不完全清楚。目前認為PPARγ配體作為PPARγ的激動劑，可抑制HSC的增殖，減少肝內膠原積聚和增加肝內膠原酶活性。

4、本研究旨在探討不同濃度的PPARγ特異配體羅格列酮對HSC合成基質金屬蛋白酶、金屬蛋白酶組織抑制物及膠原的影響，以期進一步證實PPARγ對HSC生物學特性的影響，對研究肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展機制及臨床治療具有重要的意義。
　　 方法：①細胞培養(yǎng)：用含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)HSC-T6，傳4-5代后接種于塑料細胞培養(yǎng)瓶，換用無胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞貼壁后分組。分為A組：空白對照組；B組：5umol/L羅格列酮

5、組；C組：10umol/L羅格列酮組；D組：15umol/L羅格列酮組；E組：20umol/L羅格列酮組。分別于培養(yǎng)24h后收取細胞。每組均培養(yǎng)6瓶。
　　 ②檢測不同濃度組MMPS、TIMPs及膠原的改變。用TR-izol試劑盒，參照說明抽提細胞的總RNA。利用半定量RT-PCR測定MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、COLⅠ、COLⅢ mRNA水平的表達。瓊脂糖凝膠電泳后使用Quantity One圖像分析系

6、統(tǒng)分析。
　　 ③數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析：檢測值以均數(shù)±標準差表示，采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包進行方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：實驗結果顯示：TIMP-1的含量A>B>C>D>E；TIMP-2：A>B>C>D>E：COLⅠ：A>B>C>D>E；COLⅢ：A>B>C>D>E；MMP-2：A

7、的表達，抑制HSC表達TIMP-1、TIMP-2、COLⅠ、COLⅢ（P<0.01），并在一定范圍內，呈劑量依賴性（P<0.01）。
　　 結論：羅格列酮通過上調PPARγ可以抑制HSC的增殖與活化，下調TIMPs的表達，增強MMPs的活性，從而增加ECM的降解，促進HSC凋亡，逆轉肝纖維化。因此，PPARγ對HSC活化的分子調節(jié)在肝纖維化發(fā)生中起著重要作用，隨著對PPARγ在肝纖維化中調節(jié)作用的深入研究，將為肝纖維化的治療提供