瘦素對滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力和內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響及與子癇前期關(guān)系的研究.pdf

1、本研究分為四部分：
　　 第一部分：瘦素在正常妊娠與子癇前期患者血清及胎盤組織中的表達(dá)的研究
　　 目的: 1. 研究正常妊娠及子癇前期患者血清及胎盤組織中瘦素蛋白及mRNA表達(dá)差異，探討瘦素與子癇前期的關(guān)系。
　　 2.檢測TNF－α和脂聯(lián)素在正常妊娠及子癇前期患者血清及胎盤組織中的表達(dá)，探討它們與瘦素在子癇前期發(fā)病機(jī)制中的相關(guān)性。
　　 方法: 1. 采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）定量檢測24例正常

2、妊娠及44例子癇前期患者血清中瘦素、TNF－α及脂聯(lián)素的表達(dá)水平。
　　 2. 采用伊紅－蘇木素（HE）染色，光鏡下觀察正常妊娠胎盤與子癇前期患者胎盤結(jié)構(gòu)的病理學(xué)改變，用免疫組織化學(xué)法半定量檢測21例正常妊娠及55例子癇前期患者胎盤組織中瘦素、TNF－α及脂聯(lián)素的蛋白表達(dá)。
　　 3. 采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）分

3、別檢測10例正常足月妊娠及20例子癇前期患者（其中輕度10例，重度10例）的胎盤組織中瘦素和脂聯(lián)素的mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果: 1. 輕度及重度子癇前期患者瘦素血清水平均明顯高于正常孕婦，重度組脂聯(lián)素水平明顯低于正常組，而TNF-α水平明顯高于正常組；且重度組中瘦素與TNF－α呈正相關(guān)，脂聯(lián)素與TNF－α成負(fù)相關(guān)。
　　 2. 妊娠時(shí)胎盤中瘦素主要分布于滋養(yǎng)細(xì)胞胞膜、胞漿及核膜上。子癇前期胎盤中瘦素蛋白表達(dá)較正常妊

4、娠顯著升高，而脂聯(lián)素蛋白表達(dá)較正常妊娠明顯降低，重度子癇前期組中瘦素與TNF－α表達(dá)呈正相關(guān)。
　　 3. 正常妊娠胎盤中瘦素與脂聯(lián)素mRNA的表達(dá)量分別為0.564±0.336、1.610±0.528，而子癇前期胎盤中瘦素的表達(dá)量明顯增加，輕度組為0.778±0.175，重度組為1.174±0.556；與之相反地，脂聯(lián)素的表達(dá)量明顯下降，輕度組為1.363±0.475，重度組為0.636±0.218。且隨著病情的加重，瘦素表達(dá)

5、量的升高，脂聯(lián)素表現(xiàn)出明顯的下降趨勢。
　　 結(jié)論:瘦素表達(dá)增高與子癇前期密切相關(guān)，其他脂肪細(xì)胞因子如TNF－α和脂聯(lián)素與瘦素之間的相互作用相互影響，可能是其參與子癇前期發(fā)病重要機(jī)制之一。
　　 第二部分：瘦素在滋養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá)及對滋養(yǎng)細(xì)胞增殖和分泌功能的影響
　　 目的: 1. 研究缺氧對人早孕絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞株（TEV－1）瘦素及脂聯(lián)素表達(dá)的影響，從細(xì)胞水平探討瘦素及其他脂肪細(xì)胞因子與子癇前期的關(guān)系。
　　

6、 2. 研究缺氧、重組人leptin蛋白和TNF－α蛋白對滋養(yǎng)細(xì)胞株增殖及分泌功能的影響，深入研究其對滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)特性的調(diào)控作用。
　　 方法: 1. 利用二氯化鈷誘導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞化學(xué)缺氧，模擬體外缺氧環(huán)境，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription polymerasechain reaction，RT-PCR）檢測瘦素和脂聯(lián)素的基因表達(dá)。
　　 2. 利用二氯化鈷、不同濃度的重組人leptin

7、溶液和TNF－α溶液在體外分別干預(yù)滋養(yǎng)細(xì)胞生長，采用熒光定量PCR檢測瘦素的基因表達(dá)，噻唑蘭（Methl thiazolyl tetrazolium，MTT）比色法測定缺氧、leptin和TNF－α對滋養(yǎng)細(xì)胞增殖的影響。
　　 結(jié)果: 1. 隨著缺氧時(shí)間的增加，滋養(yǎng)細(xì)胞瘦素mRNA表達(dá)逐漸增加，至12h達(dá)峰值，且與正常培養(yǎng)相比瘦素表達(dá)量顯著升高，此后逐漸下降；隨著缺氧時(shí)間的延長，滋養(yǎng)細(xì)胞脂聯(lián)素mRNA表達(dá)逐漸減少，至12h時(shí)與正

8、常培養(yǎng)相比脂聯(lián)素表達(dá)量明顯降低，此后逐漸下降。
　　 2. 終濃度為5ng/ml瘦素和不同濃度的TNF－α均可顯著促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞leptin mRNA的表達(dá)，干預(yù)時(shí)間對此作用無明顯影響。
　　 3.缺氧抑制了滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖，且24h時(shí)抑制最為明顯；瘦素干預(yù)滋養(yǎng)細(xì)胞24h后，且終濃度為10ng/ml的瘦素抑制作用最為明顯；而TNF－α對滋養(yǎng)細(xì)胞增殖無明顯影響。
　　 結(jié)論:子癇前期中瘦素表達(dá)的增加與脂聯(lián)素減少與滋養(yǎng)細(xì)

9、胞缺氧是密切相關(guān)的。體外缺氧可誘導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生類似子癇前期的改變。另外，TNF－α可促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞分泌瘦素，并且小劑量瘦素對滋養(yǎng)細(xì)胞瘦素的自分泌起到正反饋調(diào)節(jié)作用。
　　 第三部分：瘦素、TNF-á和缺氧對滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力影響的研究
　　 目的:研究缺氧、重組人leptin蛋白和TNF－α蛋白對滋養(yǎng)細(xì)胞株侵襲功能的影響，進(jìn)一步研究其對滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)特性的調(diào)控及其在子癇前期發(fā)病中的機(jī)制。
　　 方法:利用二氯化鈷、不

10、同濃度的重組人leptin溶液和TNF－α溶液在體外分別干預(yù)滋養(yǎng)細(xì)胞生長，采用Transwell體外侵襲實(shí)驗(yàn)檢測缺氧、leptin和TNF－α對滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力的影響。
　　 結(jié)果:缺氧抑制了滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲，且缺氧24h時(shí)抑制作用最顯著；瘦素可促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲，且隨著瘦素濃度的增高，滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲越顯著；TNF－α也可促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲，但其作用與濃度無關(guān)。
　　 結(jié)論:體外培養(yǎng)時(shí)缺氧條件下滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲是受到抑制的，而

11、瘦素及TNF－α均可促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲，這是它們引起子癇前期發(fā)病的機(jī)制之一。
　　 第四部分：瘦素在內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)及對內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響
　　 目的:1. 研究缺氧對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株（VEC304）瘦素表達(dá)的影響，從細(xì)胞水平探討瘦素在內(nèi)皮細(xì)胞損傷方面與子癇前期的關(guān)系。
　　 2. 研究缺氧、重組人leptin蛋白和TNF－α蛋白對內(nèi)皮細(xì)胞株增殖及分泌功能的影響，深入研究胎盤源性毒性因子在內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的作用。<

12、br>　　 方法: 1. 利用二氯化鈷誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞化學(xué)缺氧，模擬體外缺氧環(huán)境，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription polymerasechain reaction，RT-PCR）檢測瘦素基因的表達(dá)。
　　 2. 利用二氯化鈷、不同濃度的重組人leptin溶液和TNF－α溶液在體外分別干預(yù)內(nèi)皮細(xì)胞生長，采用熒光定量PCR檢測瘦素的基因表達(dá)，噻唑蘭（Methl thiazolyl tetrazoli

13、um，MTT）比色法測定缺氧、leptin和TNF－α對內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響。
　　 結(jié)果: 1. 隨著缺氧時(shí)間的增加，內(nèi)皮細(xì)胞瘦素mRNA表達(dá)量逐漸降低，但仍高于同期對照組，培養(yǎng)24h時(shí)卻明顯低于同期正常對照，此后逐漸下降。
　　 2. 終濃度為5ng/ml瘦素和不同濃度的TNF－α均可顯著促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞leptin mRNA的表達(dá)，干預(yù)時(shí)間對此作用無明顯影響。
　　 3. 缺氧抑制了內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，且48h時(shí)抑制