局部溫?zé)釋?duì)小鼠表皮朗格漢斯細(xì)胞數(shù)量和形態(tài)的影響.pdf

1、朗格漢斯細(xì)胞(Langerhans Cell，LC)是表皮中的抗原提呈細(xì)胞，在皮膚免疫功能中發(fā)揮重要作用。作為表皮中最重要的抗原提呈細(xì)胞，LC能識(shí)別、攝取、加工處理抗原，并轉(zhuǎn)移至局部淋巴結(jié)，將抗原提呈給T淋巴細(xì)胞。LC離開(kāi)表皮進(jìn)入淋巴結(jié)的過(guò)程是其誘導(dǎo)特異性皮膚免疫反應(yīng)關(guān)鍵的一步。 本實(shí)驗(yàn)利用自主研制的溫?zé)嶂委熢O(shè)備加熱小鼠皮膚，觀察溫?zé)崽幚砗笮∈蟊砥?nèi)抗原提呈細(xì)胞-LC的數(shù)量及形態(tài)的動(dòng)態(tài)變化情況，初步闡明溫?zé)釋?duì)小鼠表皮內(nèi)LC的影響

2、，為溫?zé)嶂委熎つw疾病提供部分免疫學(xué)理論依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)材料和方法一、 第一部分:溫?zé)釋?duì)小鼠表皮LC數(shù)量和形態(tài)的影響 1、材料:8周齡雌性SPF級(jí)Balb/C小鼠24只，隨機(jī)分為37℃組(對(duì)照組)、39℃組和41℃組。每只小鼠背部選擇4個(gè)面積為1.0×1.0cm的皮膚作為加熱部位(脊柱兩側(cè)每側(cè)各2個(gè)部位)，剃毛、麻醉后，采用遠(yuǎn)紅外局部溫?zé)嶂委焹x(我科和合作單位聯(lián)合研制，精度為±0.1℃)局部加熱小鼠皮膚，每個(gè)部位持續(xù)加

3、熱20分鐘，每只小鼠的4個(gè)部位均采用一種加熱溫度。四個(gè)部位分別于加熱后的24、48、72、96小時(shí)時(shí)間點(diǎn)，依次剪取被加熱的皮膚。 2、方法 將剪取的皮膚組織放入EDTA分離液(PH=7.2)中，37℃水浴箱水浴2小時(shí)，取出皮片，在解剖顯微鏡下分離真表皮。采用免疫組織化學(xué)的方法染色表皮內(nèi)LC。光學(xué)顯微鏡下觀察LC，細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)呈棕褐色樹(shù)突狀細(xì)胞為L(zhǎng)C，于400倍光鏡下每張片隨機(jī)選取5個(gè)非連續(xù)視野，計(jì)數(shù)方格內(nèi)的陽(yáng)性細(xì)

4、胞數(shù)，計(jì)算出單位面積內(nèi)細(xì)胞的密度，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示(x±s)。 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0 for Windows軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理。組內(nèi)和組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)效能為0.05。 二、第二部分:局部溫?zé)嵋鸬男∈蟊砥C動(dòng)態(tài)變化的觀察 1、材料:8周齡雌性SPF級(jí)Balb/C小鼠29只，隨機(jī)分為未處理組(5只)，37℃組(8只)，39℃組(8只)和41℃組(8只)。在每只

5、小鼠背部選擇4個(gè)面積為1.0×1.0cm的皮膚作為加熱部位(脊柱兩側(cè)每側(cè)各2個(gè)部位)，剃毛、麻醉后，采用遠(yuǎn)紅外局部溫?zé)嶂委焹x局部加熱小鼠皮膚，每個(gè)部位持續(xù)加熱20分鐘，每只小鼠的4個(gè)部位均采用一種加熱溫度。分別于加熱后第1、3、5、7天時(shí)間點(diǎn)剪取被加熱的皮膚。 2、方法:及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)同第一部分 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 一、第一部分溫?zé)釋?duì)小鼠表皮LC數(shù)量和形態(tài)的影響 37℃組，I-A染色陽(yáng)性細(xì)胞分布較均勻，有較多的樹(shù)突。

6、39℃組和41℃組，第24、48、72、96小時(shí)取材，光鏡所見(jiàn)：表皮內(nèi)朗格漢斯細(xì)胞變圓、變小，樹(shù)突數(shù)量減少甚至消失、長(zhǎng)度變短，第72小時(shí)光鏡下僅見(jiàn)少量朗格漢斯細(xì)胞以及較多的點(diǎn)狀或者條索樣樹(shù)突。 39℃組、41℃組各時(shí)間點(diǎn)的LC密度分別與37℃組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較，LC密度明顯下降，有顯著性差異(P<0.01)。 39℃組與41℃組，兩組LC密度在各對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比，在24、48小時(shí)，二者具有顯著性差異(P<0.05)；在72、

7、96小時(shí)，二者沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。 39℃組、41℃組小鼠表皮內(nèi)LC密度均在加熱后開(kāi)始下降，72小時(shí)左右LC密度達(dá)到最低，然后呈逐漸上升的趨勢(shì)。其中，最初的48小時(shí)左右，41℃組LC密度的下降速度及幅度都要大于39℃組，但隨后，41℃組的LC密度減少速度逐漸變緩，而39℃組的LC密度減少速度加劇；72小時(shí)左右，兩組小鼠表皮LC密度都達(dá)到最低水平，兩個(gè)最低值之間差異沒(méi)有顯著性(P>0.05)。 二、第二部分:局

8、部溫?zé)嵋鸬男∈蟊砥C動(dòng)態(tài)變化的觀察37℃組與未處理組相比，兩組組內(nèi)以及兩組之間LC密度沒(méi)有顯著差異(P>0.05)。 39℃組、41℃組分別與未處理組、37℃組相比，第1、3、5天時(shí)間點(diǎn)的LC密度差異均有顯著性(P<0.05)；在第7天時(shí)間點(diǎn)，LC密度差異無(wú)顯著性(P>0.05)。 39℃組和41℃組，第1天，兩組LC密度差異具有顯著性(P<0.01)；第3天，兩組LC密度差異沒(méi)有顯著性(P>0.05)，這個(gè)結(jié)果與實(shí)

9、驗(yàn)第一部分結(jié)果吻合。第5天以及第7天，兩組LC密度之間均沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： 通過(guò)我們的研究觀察，得出以下結(jié)論： 溫?zé)崮軌蛲ㄟ^(guò)影響表皮內(nèi)LC而影響皮膚的免疫功能狀態(tài)，溫?zé)嵋鹦∈蟊砥?nèi)LC數(shù)量和形態(tài)的變化，提示溫?zé)峥赡艽龠M(jìn)LC遷移和成熟，提示溫?zé)嵩诿庖叻磻?yīng)誘導(dǎo)時(shí)期起增強(qiáng)作用。 溫?zé)嵋鸬腖C數(shù)量減少是可逆轉(zhuǎn)的，小鼠表皮受到溫?zé)岽碳ぷ饔弥?，表皮?nèi)LC數(shù)量逐漸下降，72小時(shí)左右降到最低，