環(huán)孢素A對(duì)小鼠植入前胚胎細(xì)胞數(shù)量與黏附功能的影響.pdf

1、目的:探討環(huán)孢素A(cyclosporineA，CsA)對(duì)植入前小鼠胚胎細(xì)胞的增殖、分化及其黏附與侵襲功能的影響，為臨床中改善胚胎種植提供新的思路和方法。
　　 方法:取小鼠1.5dpc/3.5dpc胚胎，在含有不同濃度CsA的G-1/G-2培養(yǎng)液中（第一組:10μM;第二組:1μM;第三組:0.1μM;第四組:0μM，對(duì)照）序貫培養(yǎng)。5.5dpc以后的培養(yǎng)使用lammin包被的35mm平皿。每天下午2時(shí)觀察胚胎。3.5dpc時(shí)

2、觀察囊胚形成情況;4.5dpc時(shí)運(yùn)用免疫染色方法計(jì)數(shù)囊胚的細(xì)胞總數(shù)、內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(innercellmass，ICM)及滋養(yǎng)層的細(xì)胞數(shù)目;5.5dpc時(shí)觀察囊胚孵出;7.5dpc時(shí)胚胎的粘附并拍照測(cè)量其在皿里的伸展面積。計(jì)數(shù)用SPSS16.0軟件包處理和差異性檢驗(yàn)，P＜0.05時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果從小鼠胚胎1.5dpc起，加入不同濃度的CsA，3.5dpc時(shí)第一、第二、第三和第四組的囊胚形成率分別為:87.9％、84.

3、1％、84.5％和82.7％（和第四組比較P值分別為:0.180、0.778、0.673）。4.5dpc時(shí)，第一、第二、第三和第四組囊胚細(xì)胞總數(shù)分別為:57.1622±17.25546、54.359±12.17523、52.8611±9.68106、49.234±11.46870。與對(duì)照組相比，P分別為:0.019、0.046、0.148。滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞數(shù):44.9730±14.57450、42.1026±11.85170、40.527

4、8±10.93146、38.6383±8.92664。與對(duì)照組比較，P分別為:0.025、0.163、0.401。ICM細(xì)胞數(shù):12.1892±4.08138、12.2564±3.54459、12.3333±3.94244、10.5957±3.68699。與對(duì)照組比較，P分別為:0.064、0.031、0.042。5.5dpc時(shí)第一、第二、第三和第四組囊胚孵出率依次為:80.5％、72.3％、74.2％、70.3％。與對(duì)照組比較，P值分

5、別為:0.046、0.710、0.445。從小鼠胚胎3.5dpc起加入不同濃度的CsA，7.5dpc第一、第二、第三和第四組胚胎黏附率分別為:81.0％、90.5％、90.8％、82.9％。與對(duì)照組比較，P分別為:0.738、0.09、0.06。黏附胚胎在皿中伸展面積(單位:μM2)第一、第二、第三和第四組分別為:20509±10403.46324、23076±8950.46379、17830±8112.33932、16537±8663

6、.28995。P分別為:0.118、0.004、0.54。
　　 結(jié)論:1.不同濃度(10μM、1μM、0.1μM、0μM)的CsA在小鼠胚胎早期發(fā)育過程，對(duì)小鼠胚胎囊胚形成的影響差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.CsA可以促進(jìn)植入前胚胎的細(xì)胞增值，其中在10μM濃度下可以增加滋養(yǎng)層的細(xì)胞數(shù)，而在1μM及0.1μM濃度下可以增加囊胚的內(nèi)細(xì)胞數(shù)量。
　　 3.CsA在10μM的濃度下能夠促進(jìn)小鼠胚胎的孵出。