扶芳藤益心方對(duì)氣虛血瘀證胸痹（慢性穩(wěn)定性心絞痛）的臨床及內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：
　?。?）臨床觀察扶芳藤益心方治療氣虛血瘀證胸痹（慢性穩(wěn)定性心絞痛）患者的臨床療效及其內(nèi)源活性物質(zhì)水平變化的影響。
　　（2）實(shí)驗(yàn)研究扶芳藤益心方對(duì)體外缺氧/復(fù)氧（H/R）損傷后人心內(nèi)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUMCE）的保護(hù)作用及機(jī)制。
　　方法：
　?。?）臨床上選擇82例氣虛血瘀證胸痹（慢性穩(wěn)定性心絞痛）患者，年齡在35-79歲之間，隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組，每組各41例。對(duì)照組為常規(guī)西藥治療(抗血小板藥物

2、、硝酸酯類、β受體阻滯劑、ACEI等)；治療組在對(duì)照組常規(guī)西藥治療基礎(chǔ)上加扶芳藤益心方湯劑口服，早晚各1次，每次200ml。兩組療程均為4周。觀察兩組治療前后的中醫(yī)證候療效、心絞痛療效、心電圖療效及患者血清VEGF、ET-1、hs-CRP、IL-1β水平的變化。
　?。?）通過扶芳藤益心方、益心方水提和醇提的比較，選擇提取率高者作為扶芳藤益心方、益心方提取方法。觀察扶芳藤益心方、益心方水提物和醇提物對(duì)小鼠的急性毒性試驗(yàn)，評(píng)價(jià)藥物的

3、安全性。采用血清藥理學(xué)方法，制備不同階梯濃度的扶芳藤益心方和益心方含藥大鼠血清干預(yù)HUMCE，采用MTT法檢測(cè)HUMCE活性，選擇最佳的含扶芳藤益心方、益心方大鼠血清濃度。實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為正常組和造模組：模型對(duì)照組、扶芳藤益心方組、益心方組、陽性對(duì)照組（卡托普利10-2mol/L(CAP1)、10-3mol/L(CAP2)、10-4mol/L(CAP3)）。體外建立H/R損傷后 HUMCE模型，根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組，采用含藥大鼠血清干預(yù)：MTT法檢

4、測(cè)HUMCE活力，流式細(xì)胞儀檢測(cè) HUMCE的Caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)；硝酸還原酶法檢測(cè)HUMCE上清液中NO含量和NOS活力；ELISA法檢測(cè)HUMCE上清液中VEGFR-2和VEGF的含量；Western blot法檢測(cè)HUMCE的ET-1和ECE蛋白表達(dá)水平；PCR法檢測(cè) HUMCE的ET-mRNA和iNos-mRNA基因表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　?。?）中醫(yī)證候療效比較：治療組總有效率90.2％，對(duì)照組總有效率7

5、3.2%，兩組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；心絞痛療效比較：治療組總有效率87.8%，對(duì)照組總有效率82.9%，兩組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；心電圖療效比較：治療組總有效率75.6%，對(duì)照組總有效率61.0%，兩組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；兩組治療后VEGF水平均較治療前顯著升高，且治療組 VEGF升高水平顯著高于對(duì)照組(P<0.01)；兩組治療后ET-1、hs-CRP、IL-1β水平均明顯下降，且治療組ET-1、hs-CRP、IL-1β下降水平優(yōu)于對(duì)照組(

6、P<0.05)。
　?。?）扶芳藤益心方和益心方醇提優(yōu)于水提，且扶芳藤益心方和益心方醇提物小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)安全；2倍人日用劑量扶芳藤益心方和4倍人日用劑量益心方制備大鼠含藥血清對(duì)H/R損傷后HUMCE活性最佳。
　?。?）模型對(duì)照組：與扶芳藤益心方組，益心方組，CAP1組、CAP2組、CAP3組比較：模型對(duì)照組的細(xì)胞活力、NO含量、NOS活力、VEGF濃度、VEGFR-2濃度及iNOS-mRNA基因表達(dá)均降低，Caspase

7、-3陽性細(xì)胞數(shù)也降低，分別降低了9.87%、3.1%、14.26%、7.38%、4.17%；模型對(duì)照組的ET-1、ECE蛋白及ET-mRNA基因表達(dá)均明顯升高。扶芳藤益心方組：與益心方組比較，益心方組的細(xì)胞活性、NO含量、NOS活力、VEGF濃度、VEGFR-2濃度及iNOS-mRNA基因表達(dá)均降低，ET-1、ECE蛋白表達(dá)及ET-mRNA基因表達(dá)明顯增加，Caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)降低6.77%；與CAP1組比較，CAP1組的細(xì)胞活

8、性、NO含量、NOS活力、VEGF濃度、VEGFR-2濃度及iNOS-mRNA基因表達(dá)均升高，Caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)升高4.39%，ET-1、ECE蛋白及ET-mRNA基因表達(dá)均降低；與CAP2組比較，CAP2組的細(xì)胞活性、NO含量降低，Caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)降低了2.49%，ET-1、ECE蛋白表達(dá)及ET-mRNA基因表達(dá)明顯增加；與CAP3組比較，CAP3組的細(xì)胞活性、NO含量、VEGF濃度、VEGFR-2濃度均降低，C

9、aspase-3陽性細(xì)胞數(shù)降低了5.70%，ET-1、ECE蛋白表達(dá)及ET-mRNA基因表達(dá)均明顯增加。益心方組：與CAP1組、CAP2組、CAP3組比較，CAP1組、CAP2組、CAP3組的細(xì)胞活性、NO含量、NOS活力和VEGF濃度、VEGFR-2濃度均升高，ET-1、ECE蛋白及ET-mRNA基因表達(dá)均降低，CAP1組、CAP2組的iNOS-mRNA基因表達(dá)增加，CAP3組的iNOS-mRNA基因表達(dá)降低。量、VEGF濃度、VEG

10、FR-2濃度均降低，Caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)降低了5.70%，ET-1、ECE蛋白表達(dá)及ET-mRNA基因表達(dá)均明顯增加。益心方組：與CAP1組、CAP2組、CAP3組比較，CAP1組、CAP2組、CAP3組的細(xì)胞活性、NO含量、NOS活力和VEGF濃度、VEGFR-2濃度均升高，ET-1、ECE蛋白及ET-mRNA基因表達(dá)均降低，CAP1組、CAP2組的iNOS-mRNA基因表達(dá)增加，CAP3組的iNOS-mRNA基因表達(dá)降低。<

11、br>　　結(jié)論：
　　(1)扶芳藤益心方可以緩解氣虛血瘀證胸痹（慢性穩(wěn)定性心絞痛）患者的心絞痛，改善中醫(yī)證候和心電圖缺血表現(xiàn)，且增加患者VEGF分泌，減少ET-1、hs-CRP、IL-1β分泌，從而調(diào)節(jié)內(nèi)源性活性物質(zhì)平衡及抑制其炎癥反應(yīng)，保護(hù)人心內(nèi)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)其功能的恢復(fù)。
　?。?）扶芳藤益心方、益心方均能增加H/R損傷后HUMCE的增殖活性，且可促進(jìn)人心內(nèi)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞 VEGF、VEGFR-2與 NO、NO