豬乙型腦炎新型協(xié)同凝集試驗(yàn)的建立.pdf

1、本文對豬乙型腦炎新型協(xié)同凝集試驗(yàn)的建立進(jìn)行了研究。研究結(jié)果如下：1.根據(jù)已發(fā)表的JEVSA14-14-2減毒株基因組序列，GenBank上發(fā)表的豬IgG1序列為模板設(shè)計兩對特異性引物，通過PCR擴(kuò)增出一條長0.473bp的基因片段和一條長0.469bp的基因片段；2.為驗(yàn)證JEVE’基因在E.coli中表達(dá)的可行性及表達(dá)產(chǎn)物的抗原性，構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET-E'，對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行Westernblotting分析，結(jié)果與JEV特異性豬抗

2、血清呈現(xiàn)陽性反應(yīng)，且無非特異性條帶出現(xiàn)，證明表達(dá)產(chǎn)物抗原性較好；3.構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET-E'-CH3，誘導(dǎo)表達(dá)，超聲破碎菌體，對包涵體純化，進(jìn)行SDS-PAGE，結(jié)果在43kD處出現(xiàn)一條清晰的特異性蛋白條帶，雜蛋白很少，純化良好；4.確定最佳吸附濃度為1.892；血清和金黃色葡萄球菌的比例為：1∶4；最佳吸附時間確定為一個半小時，用LB培養(yǎng)的金黃色葡萄球菌的吸附效果最好；5.確定制作穩(wěn)定液SPA和蛋白的最佳比例為1.276∶0.9