全基因組重測(cè)序技術(shù)分析漢族瘢痕疙瘩家系基因多態(tài)性及初步研究.pdf

1、瘢痕是人體創(chuàng)傷修復(fù)過程中的必然產(chǎn)物，是創(chuàng)傷后引起的皮膚外觀形態(tài)和組織病理改變的統(tǒng)稱。瘢痕過度生長(zhǎng)，出現(xiàn)外形破壞及功能障礙就會(huì)給患者心理和生理上帶來傷害。這其中較為嚴(yán)重的是增生性瘢痕和瘢痕疙瘩，它們統(tǒng)稱為病理性瘢痕。對(duì)于病理性瘢痕特別是瘢痕疙瘩的病因及治療目前并沒有明確的解釋和標(biāo)準(zhǔn)。瘢痕疙瘩以散發(fā)為主，但存在于各種族，且有種族差異并有遺傳傾向。家族性發(fā)病雖然占比不高，但在研究瘢痕疙瘩的病因?qū)W中卻有重要的意義。通過既往的遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)了其在

2、家族性發(fā)病中的遺傳規(guī)律，并通過基因研究技術(shù)（如全基因組關(guān)聯(lián)、基因芯片技術(shù)等）在瘢痕疙瘩患者不同人種、地區(qū)的群體中發(fā)現(xiàn)了眾多的易感基因位點(diǎn)及相關(guān)基因（如：rs980504、rs1866744、P53、HLA、TGF-β系列、SMAD系列等等），并對(duì)他們的作用機(jī)制及表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了深入的研究。但由于瘢痕疙瘩病因的多樣性和復(fù)雜性，關(guān)于瘢痕疙瘩的病因機(jī)制尚未完全闡明。在大量中國(guó)漢族的病理性瘢痕患者中，亦有學(xué)者研究并驗(yàn)證了部分易感基因位點(diǎn)的存在。但

3、對(duì)漢族人群的基因變異位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)并不多見。我們對(duì)臨床工作中篩選的四例瘢痕疙瘩家系進(jìn)行了全面的臨床調(diào)查，并對(duì)其中一例家系進(jìn)行了全基因組重測(cè)序，發(fā)現(xiàn)一些具有遺傳特征的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)及其他形式的基因變異。隨后對(duì)這些變異位點(diǎn)在散發(fā)的瘢痕疙瘩及增生性瘢痕患者中進(jìn)行了部分的驗(yàn)證工作，以期探索這些基因變異在瘢痕疙瘩形成過程中所起的作用。
　　第一部分中國(guó)漢族瘢痕疙瘩家系的資料采集及遺傳學(xué)分析
　　目的：
　　對(duì)四例中國(guó)漢族瘢痕疙

4、瘩家系成員進(jìn)行臨床調(diào)查并分析其臨床及遺傳學(xué)特點(diǎn)。
　　方法：
　　收集中國(guó)漢族瘢痕疙瘩家系信息及臨床資料，對(duì)141名調(diào)查家系成員，其中瘢痕疙瘩22人進(jìn)行臨床調(diào)查；繪制家系圖譜，運(yùn)用遺傳學(xué)方法分析其遺傳模式并總結(jié)家系內(nèi)該病的臨床特征。
　　結(jié)果：
　　四個(gè)漢族瘢痕疙瘩家系均為四代以上家系；三代發(fā)病家系3例與四代發(fā)病家系1例；家系內(nèi)發(fā)病率20.6％，男性發(fā)病率18.3%，女性發(fā)病率23.4%，前胸部發(fā)病率40.9%；

5、家系遺傳模式符合常染色體顯性遺傳，伴外顯不完全，總體不外顯率12%。
　　結(jié)論：
　　這四個(gè)瘢痕疙瘩家系的遺傳模式與其他報(bào)道相似，發(fā)病率無性別差異但有發(fā)病部位差異，家系調(diào)查有助于揭示瘢痕疙瘩的遺傳學(xué)特點(diǎn)。
　　第二部分瘢痕疙瘩家族血液樣本的DNA提取及全基因組重測(cè)序分析
　　目的：
　　應(yīng)用全基因組重測(cè)序技術(shù)對(duì)一例瘢痕疙瘩家系成員進(jìn)行 DNA測(cè)序，篩選致病基因的突變信息。
　　方法：
　　收集瘢

6、痕疙瘩家系資料及臨床信息，采集家系特定成員外周靜脈血樣5份，其中4例瘢痕疙瘩患者，1例正常人，提取其DNA進(jìn)行全基因組重測(cè)序并設(shè)計(jì)軟件分析比對(duì)，篩選疾病相關(guān)序列突變及致病基因信息。
　　結(jié)果：
　　篩選出疾病相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性27個(gè)，插入缺失變異9個(gè)，大結(jié)構(gòu)變異2個(gè)，拷貝數(shù)變異15個(gè)，關(guān)聯(lián)至51個(gè)基因，通過GO注釋和pathway分析篩選出19個(gè)與瘢痕疙瘩密切相關(guān)的基因。
　　結(jié)論：
　　本組家系系常染色體顯性

7、遺傳伴外顯不完全，通過全基因組重測(cè)序技術(shù)篩選出新的與瘢痕疙瘩疾病密切相關(guān)的基因，為瘢痕防治研究提供新的研究方向和目標(biāo)。
　　第三部分四個(gè)SNPs位點(diǎn)在中國(guó)漢族瘢痕疙瘩和增生性瘢痕人群中的檢測(cè)和分析
　　目的：
　　通過對(duì)四個(gè)新發(fā)現(xiàn)的與家系瘢痕疙瘩相關(guān)的 SNPs位點(diǎn)在瘢痕疙瘩及增生性瘢痕患者人群基因分型進(jìn)行檢測(cè)，驗(yàn)證SNPs對(duì)疾病的影響。
　　方法：
　　在全基因組重測(cè)序的基礎(chǔ)上我們選擇了四個(gè)SNPs作為目

8、的位點(diǎn)。收集71例瘢痕疙瘩和50例增生性瘢痕患者外周血液樣本，提取DNA后運(yùn)用PCR-Mass ARRAY技術(shù)對(duì)SNPs的基因分型檢測(cè)。.
　　結(jié)果：
　　在rs181924090（P=0.0075），rs183178644（P=0.0151）、rs151091483（P=0.0073）位點(diǎn)檢測(cè)中瘢痕疙瘩與增生性瘢痕有顯著差別，在rs141156594（p=0.7893）差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　rs1