北方漢族瘢痕疙瘩臨床特征分析及相關(guān)基因多態(tài)性研究.pdf

1、瘢痕疙瘩(Keloid)是易感個(gè)體在皮膚損傷修復(fù)過(guò)程中成纖維細(xì)胞大量增殖，膠原基質(zhì)大量分泌形成的良性真皮腫瘤，其臨床特征為瘢痕組織超越原損傷范圍持續(xù)生長(zhǎng)，侵襲周圍外觀正常皮膚，手術(shù)切除后容易復(fù)發(fā)。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其進(jìn)行了大量研究，但發(fā)病機(jī)制目前仍不清楚。近年來(lái)，遺傳學(xué)方面的研究已成為瘢痕疙瘩基礎(chǔ)研究的主要方向，其中分子遺傳學(xué)方面的研究已成為最新熱點(diǎn)。Marneros等通過(guò)全基因組掃描將一個(gè)日本人瘢痕疙瘩家系易感基因定位于2q23，一個(gè)非裔美

2、國(guó)黑人家系定位于7p11，提示瘢痕疙瘩的發(fā)生存在明顯的遺傳異質(zhì)性。 痕痕疙瘩的人群患病率報(bào)道不一，分別從扎伊爾的16％到英國(guó)的不到1％；不同人種的患病率相差很大，深色人種與淺色人種的患病率從2：1到19：1不等。大多數(shù)瘢痕疙瘩病例呈散發(fā)狀態(tài)，但也存在著家庭聚集現(xiàn)象。在南印度的一項(xiàng)1000人的流行病學(xué)調(diào)查中有家族史者占1.9％，另一項(xiàng)247人的研究表明瘢痕疙瘩患者中有家族史者占3.2％。有些綜合癥也可以合并瘢痕疙瘩，并且也表現(xiàn)為家

3、族聚集現(xiàn)象，如Rubinstein-Taybi綜合癥和Goeminne綜合癥，但它們是與瘢痕疙瘩不同的疾病。國(guó)外流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明瘢痕疙瘩患者無(wú)性別差異，發(fā)病高峰集中在10-30歲年齡段；安徽醫(yī)科大學(xué)進(jìn)行的南方漢族瘢痕疙瘩流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果與國(guó)外流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果相似，但是目前尚缺乏北方漢族瘢痕疙瘩臨床流行病學(xué)資料。 單核苷酸多態(tài)性(SNP)是近年來(lái)出現(xiàn)的第三代遺傳標(biāo)記，對(duì)疾病的早期風(fēng)險(xiǎn)性評(píng)估、早期診斷與預(yù)防以及相應(yīng)的治療等諸多方

4、面有巨大的應(yīng)用價(jià)值。單核苷酸多態(tài)性，尤其是位于蛋白編碼區(qū)和表達(dá)調(diào)控序列的SNP可能具有特定功能作用，并可以影響疾病發(fā)生的易感性。 基質(zhì)金屬蛋白酶(metal matrix proteinase，MMPs)是一個(gè)高度保守的依賴于鋅離子的內(nèi)切蛋白水解酶家族，是細(xì)胞外基質(zhì)降解過(guò)程中最主要的蛋白水解酶，在傷口愈合、惡性腫瘤的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移等病理生理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。MMPs家族至少發(fā)現(xiàn)與人類有關(guān)的17個(gè)成員，根據(jù)結(jié)構(gòu)及酶與底物親和力的不同

5、，主要將MMPs分為4組：①膠原酶(collagenase)以MMP—1為代表，主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和蛋白多糖；②明膠酶(gelatinase) MMP—2、MMP—9，又稱為明膠酶A、B，主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和彈性纖維；③基質(zhì)溶解素(stromelysin)MMP—3、MMP—7、MMP—10、MMP—11，主要作用于纖維黏連蛋白、層黏連蛋白、彈力纖維、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅸ型膠原及MMP—1、MMP—8、MMP—9；④膜

6、型金屬蛋白酶(membrane-Type matrix proteinase) MT1—MMP、 MT2—MMP、 MT3—MMP，主要作用于明膠Ⅳ型膠原、MMP—2。目前發(fā)現(xiàn)MMPs基因有一些多態(tài)性位點(diǎn)可以影響MMPs的結(jié)構(gòu)與功能，且與炎癥及纖維化疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。其中MMP—9基因尤其受到關(guān)注。人類MMP—9基因定位于染色體20q12—13，研究發(fā)現(xiàn)MMP—9有兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，C—1562T和CA—repeat，其中C—1562T

7、研究較多。 白細(xì)胞介素—6(Interleukin6)是炎癥起始階段的一個(gè)重要致炎因子，具有廣泛免疫調(diào)節(jié)作用，通過(guò)誘導(dǎo)多種細(xì)胞合成和分泌多種急性期蛋白促進(jìn)感染時(shí)多形核白細(xì)胞產(chǎn)生、活化、促進(jìn)B細(xì)胞增殖、分化及產(chǎn)生免疫球蛋白、促進(jìn)T細(xì)胞增殖、分化等，在急性期炎癥反應(yīng)中扮演著十分重要的角色。1998年Daniel Fishman首先發(fā)現(xiàn)了啟動(dòng)子—174位點(diǎn)存在G/C多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)這種多態(tài)性對(duì)于IL—6基因表達(dá)具有調(diào)控作用。對(duì)IL—6啟動(dòng)

8、子區(qū)多態(tài)性的臨床研究有助于從免疫基因的角度理解疾病的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律，探索攜帶不同等位基因的個(gè)體對(duì)某一疾病的易患性。 本研究從流行病學(xué)調(diào)查著手，歷時(shí)三年，在臨床收集680瘢痕疙瘩病例，進(jìn)行詳細(xì)的問(wèn)卷調(diào)查，從這些患者中采集120例志愿者肘靜脈血2毫升，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)－限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(Polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism，PCR—R

9、FLP)方法和測(cè)序結(jié)合對(duì)120例遼寧籍漢族瘢痕疙瘩患者和180例種族與地域相匹配的正常對(duì)照者的MMP—9—1562C/T基因多態(tài)性位點(diǎn)和IL—6—174G/C基因多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，以探討這些功能性SNP位點(diǎn)與瘢痕疙瘩的遺傳易感性的關(guān)系，為揭示瘢痕疙瘩遺傳學(xué)發(fā)病機(jī)理提供重要線索。 材料和方法： 一、研究對(duì)象 1、病例組 納入流行病學(xué)調(diào)查的680例瘢痕疙瘩患者為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院皮膚科門診及住院患者，

10、均為北方漢族人，符合臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)：增生瘢痕組織超過(guò)原損傷范圍，病程大于1年。其中知情同意后采血的120例納入多態(tài)性研究，均為彼此間無(wú)血緣關(guān)系的北方籍漢族人，其中男性54例，女性66例，發(fā)病年齡12～52歲，平均年齡26.4±5.9歲。 2、正常對(duì)照組 180例，為隨機(jī)抽取的健康體檢志愿者，北方漢族人，其中男84例，女96例，平均年齡24.3±2.7歲，彼此間無(wú)血緣關(guān)系，排除瘢痕疙瘩病史及家族史。 二、實(shí)驗(yàn)材料

11、 10％ SDS、EDTA、蛋白酶K、Tris飽和酚、氯仿、醋酸鈉、無(wú)水乙醇、TE緩沖液、瓊脂糖、LA Taq酶。 三、實(shí)驗(yàn)方法 1、采用標(biāo)準(zhǔn)的調(diào)查問(wèn)卷，利用SPSS13.0軟件分析流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)。 2、應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)－限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR—RFLP)方法對(duì)MMP—9—1562C/T及IL—6—174G/C等位基因進(jìn)行分型。 3、利用測(cè)序方法驗(yàn)證PCR—RFLP結(jié)果。 四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處

12、理 利用SPSS13.0軟件分析流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)。Hardy—Weinberg平衡吻合性檢驗(yàn)、組間基因型頻率及等位基因頻率的差異性比較采用x2檢驗(yàn)，并以優(yōu)勢(shì)比(odds ratio，OR)及其95％可信區(qū)間(confidence interval，CI)表示相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度。使用SPSS13.0軟件分析數(shù)據(jù)，認(rèn)為P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(具有顯著性差異)。 結(jié)果： 1、瘢痕疙瘩發(fā)病無(wú)性別差異；發(fā)病高峰集中在10～30歲

13、；有家族史患者發(fā)病年齡提前，而且有家族史患者更容易發(fā)生多發(fā)性瘢痕疙瘩。 2、瘢痕疙瘩與MMP—9—1562C/T基因多態(tài)性的相關(guān)研究 (1)瘢痕疙瘩組和正常對(duì)照組人群MMP—9—1562C/T基因型分布符合Hardy—Weinberg平衡定律。 (2)瘢痕疙瘩組MMP—9—1562C/T等位基因的頻率與正常對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 3、瘢痕疙瘩與IL—6—174G/C基因多態(tài)性的相關(guān)

14、研究 (1)瘢痕疙瘩組和正常對(duì)照組人群IL—6—174G/C基因型分布符合Hardy—Weinberg平衡定律。 (2)瘢痕疙瘩組IL—6—174G/C等位基因的頻率與正常對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論： 1、流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示北方漢族瘢痕疙瘩患者發(fā)病無(wú)性別差異；發(fā)病高峰集中在10～30歲；有家族史患者發(fā)病年齡提前，而且更容易發(fā)生多發(fā)性瘢痕疙瘩。 2、北方漢族瘢痕疙瘩組和正