妊娠期高血壓疾病血清特異性標(biāo)志物篩選的初步研究.pdf

1、目的：妊娠期高血壓疾病(hypertensivedisordercomplicatingpregnancy)是嚴(yán)重危害母嬰健康的產(chǎn)科疾病，是導(dǎo)致產(chǎn)婦及新生兒死亡的主要原因之一。雖經(jīng)過(guò)多年的研究，該病的發(fā)病機(jī)制至今仍未完全闡明。由于妊娠期高血壓疾病病因不明，且無(wú)有效的治療方法，所以早期篩查高危孕婦，適時(shí)監(jiān)控高危人群，對(duì)減少該病的發(fā)生、降低孕產(chǎn)婦及圍產(chǎn)兒死亡率顯得尤為重要。但至今為止尚無(wú)特異性的血清標(biāo)志物可作為早期篩查的指標(biāo)。隨著蛋白質(zhì)組學(xué)

2、的出現(xiàn)為我們研究妊娠期高血壓疾病的發(fā)病機(jī)制和早期篩查提供了一個(gè)全新的方法和思路。 蛋白質(zhì)組學(xué)是研究細(xì)胞或機(jī)體全部蛋白質(zhì)的表達(dá)及其活動(dòng)方式。蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)主要由雙向凝膠電泳和生物質(zhì)譜技術(shù)為支撐平臺(tái)，生物信息學(xué)為橋梁，對(duì)蛋白質(zhì)表達(dá)模式和蛋白組功能模式進(jìn)行研究。蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)不僅可以發(fā)現(xiàn)特異性標(biāo)志物，而且可以發(fā)現(xiàn)與疾病相關(guān)的多種方式組合的蛋白質(zhì)譜。目前利用蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)已成功地發(fā)現(xiàn)了肝癌、淋巴母細(xì)胞瘤、食管癌、卵巢癌等腫瘤

3、以及阿耳茨海默病疾病的特異性標(biāo)志物，而且在研究疾病的發(fā)病機(jī)制方面取得了可喜的突破。 本實(shí)驗(yàn)采用表面加強(qiáng)激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(Surface-EnhancedLaserDesorption/IonizationTimeofFlight-MassSpectrometry，SELDI-TOF-MS)技術(shù)繪制妊娠期高血壓疾病患者和正常孕婦血清蛋白質(zhì)譜圖，通過(guò)比較分析，篩選妊娠期高血壓疾病的血清蛋白質(zhì)特異性標(biāo)志物，以期獲得妊娠期高血壓

4、疾病早期篩查的血清學(xué)指標(biāo)，同時(shí)期望獲得疾病特異性相關(guān)蛋白，為我們深入研究該病的發(fā)病機(jī)制提供了新的方向。 方法：1.收集孕34+1～40+2周妊娠期高血壓疾病患者及正常孕婦血清各21例，用SELDI-TOF-MS技術(shù)繪制血清蛋白質(zhì)譜圖，篩選妊娠期高血壓疾病的血清特異性標(biāo)志物。 2.收取孕13～16周健康孕婦血清，持續(xù)隨訪，根據(jù)妊娠結(jié)果，將其分成妊娠期高血壓疾病組和正常孕婦對(duì)照組。用SELDI-TOF-MS技術(shù)比較上述兩組在

5、妊娠13～16周的血清蛋白質(zhì)組差異，同時(shí)比較正常孕婦組在孕13～16周與孕38～40周血清蛋白質(zhì)組差異，進(jìn)行早期血清特異性標(biāo)志物的篩選以及發(fā)病機(jī)制的探討。 結(jié)果：1.妊娠期高血壓疾病患者與正常晚期妊娠孕婦的血清蛋白質(zhì)譜圖在質(zhì)荷比(mass/charge，M/Z)為1000～20000的范圍內(nèi)有明顯差異。妊娠期高血壓疾病患者血清中，M/Z為3245的蛋白質(zhì)相對(duì)含量(0.46±0.41)明顯低于正常孕婦(1.28±0.44)(P＜0

6、.05)，而M/Z為1324、13749的蛋白質(zhì)相對(duì)含量(1.59±0.08、0.87±0.03)均高于正常孕婦(1.23±0.03、0.55±0.07)(P＜0.05)。 2.在質(zhì)荷比為1000～20000的范圍內(nèi)，妊娠期高血壓疾病患者與正常孕婦的血清蛋白質(zhì)組譜圖在孕13～16周時(shí)存在差異。妊娠期高血壓疾病組的血清蛋白質(zhì)譜圖中M/Z為1324、3942、8895、13749的蛋白質(zhì)的相對(duì)含量(1.61±0.10；14.89±3

7、.24；9.80±2.38；1.08±0.18)明顯高于正常對(duì)照組(1.31±0.2232.63±6.64；13.20±1.92；0.56±0.12)(P＜0.05)；而質(zhì)荷比為2824、3245的蛋白質(zhì)的相對(duì)含量明顯低于(9.70±2.40；0.52±0.35)正常對(duì)照組(13.40±2.75；1.36±0.42)(P＜0.05)。3.在M/Z為1000～20000的范圍內(nèi)，正常孕婦中期妊娠血清中有多個(gè)蛋白質(zhì)相對(duì)含量與晚期妊娠不同。中

8、期妊娠血清中M/Z為2824、4652、6117、2959、6203、5072、2732、9720、4161、4182、8942、9415、3821、4495的蛋白質(zhì)的相對(duì)含量與晚期妊娠有差異(P＜0.05)。 結(jié)論：1.在M/Z為1000～20000的范圍內(nèi)，妊娠期高血壓疾病患者與正常孕婦在妊娠晚期的血清蛋白質(zhì)組譜圖有明顯差異。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，M/Z為1324、3245、13749的蛋白質(zhì)組有望作為妊娠期高血壓疾病的血清特異性標(biāo)

9、志物。 2.在M/Z為1000～20000的范圍內(nèi)，妊娠期高血壓疾病患者與正常孕婦的血清蛋白質(zhì)譜圖在妊娠13～16周存在差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，若正常孕婦在妊娠13～16周時(shí)血清蛋白質(zhì)譜圖中出現(xiàn)了由M/Z為1324、3245、13749的蛋白質(zhì)組成的蛋白質(zhì)組，可能會(huì)發(fā)展成為妊娠期高血壓疾病患者。該蛋白質(zhì)組可望作為臨床早期篩查妊娠期高血壓疾病的預(yù)警指標(biāo)，為質(zhì)譜技術(shù)應(yīng)用于妊娠期高血壓疾病早期篩查提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 3.血清中M/Z為