帕金森病患者腦脊液中疾病特異性蛋白生物標志物的初步篩選.pdf

1、目的: 繪制帕金森病(Parkinson’S disease，PD)患者，以及特發(fā)性震顫患者(essential tremor，ET)、多系統(tǒng)萎縮患者(Multiple system atrophy，MSA)、頭痛對照組腦脊液蛋白質(zhì)表達譜，并分別進行比較，尋找差異蛋白質(zhì)點；確定PD的疾病特異性蛋白(disease-specific proteins，DSPs)，探尋PD的生物標志物。 方法：采用雙向凝膠電泳(2-DE)技術(shù)，以固

2、相pH梯度等電聚焦(IPG-IEF)為第一向，垂直平板十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)為第二向分離蛋白質(zhì)；用銀染法對電泳后凝膠染色；凝膠圖像掃描并用Pdquest軟件進行圖像分析，尋找有意義的差異蛋白點；利用MALDI-TOF-MS技術(shù)對差異蛋白點進行鑒定，分析其意義；采用ELLISA對其中差異顯著蛋白進行定性和定量，驗證質(zhì)譜結(jié)果。 結(jié)果： ①獲得PD患者，以及ET患者、頭痛患者、MSA患者各組腦脊液

3、的2D-PAGE圖譜。 ②通過比較確定了六個有意義的差異蛋白點，經(jīng)鑒定分別為泛素連接酶(fubiquitin protein ligase，E3)，載脂蛋白E(Apolipoprotein E，Apo-E)，NADH-泛醌氧化還原酶ASHI亞單位(NADH-ubiquinone oxidoreductase ASHI subunit)，膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(glial fibrllary acidic protein，GFAP)，

4、蛋白(質(zhì))酪氨酸磷酸酶1B(Protein-tyrosine phosphatase 1B，PTP-1B)，載脂蛋白A I(Apolipoprotein A-I precursor，Apo-A1)。其中E3、ApoE、NADH-泛醌氧化還原酶.ASHI亞單位在PD、MSA患者組相對于ET、頭痛組下調(diào)，而后三個蛋白質(zhì)點在PD組相對于MSA、ET和頭痛組上調(diào)。 ③采用ELISA法對Apo-E進行了驗證，結(jié)果與蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果一致。