喜樹愈傷組織培養(yǎng)及相關生理研究.pdf

1、喜樹堿是一種色氨酸-萜烯類生物堿,功能抗癌、清熱、殺蟲,是一種極有開發(fā)前景的植物藥.由于資源有限,且化學合成困難、成本高,通過植物細胞培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝物質-喜樹堿將是一個很好的選擇.該文以喜樹(Camptotheca acuminataDecsne)幼嫩葉片為材料,誘導和篩選了愈傷組織,初步研究了固體培養(yǎng)條件下激素及一些理化因子對喜樹細胞生長、生理生化特性的影響,使喜樹培養(yǎng)細胞生長速度有明顯提高,為進一步研究積累了資料.具體實驗結果如下

2、:不同種類、不同濃度的激素及其組合對細胞生長的效應均不相同,選用不同培養(yǎng)基對喜樹愈傷組織誘導和繼代培養(yǎng)的基礎上,進行愈傷組織培養(yǎng),使其進一步分化,用薄層層析法檢測其是否含有喜樹堿.得出喜樹愈傷組織誘導及增殖的最佳培養(yǎng)基為:MS+NAA0.2 mg·L<'-1>+6-BA1.0 mg·L<'-1>.在喜樹細胞固體培養(yǎng)中,適宜的接種量為4g鮮重/50ml培養(yǎng)基;蔗糖的最佳添加量為30g/L;作為碳源,葡萄糖的效果優(yōu)于蔗糖,隨著葡萄糖的濃度升

3、高,細胞生長速率呈上升趨勢,且在葡萄糖濃度為30g/L時最有利于細胞生長;而椰乳與蔗糖卻對細胞生長影響差不多.愈傷組織培養(yǎng)細胞生長周期均為36天左右,細胞增殖曲線為"S"型,可大致分為延遲期、指數(shù)生長期和下降期三個時期.在不同培養(yǎng)基中,喜樹愈傷組織的可溶性蛋白質含量與喜樹堿變化曲線相似,過氧化物酶、超氧化物歧化酶的活性,三種酶活性的變化均與光照條件下喜樹細胞生長速率相一致.蛋白質組分及過氧化物酶、超氧化物歧化酶和結果表明,在愈傷組織培養(yǎng)