馬尾松幼胚培養(yǎng)及幼莖愈傷組織誘導(dǎo)研究.pdf

1、馬尾松(Pinus massoniana Lamb.)是重要的鄉(xiāng)土速生針葉樹種,有較高的綜合利用價值,探索該樹種的離體繁殖技術(shù),建立快速繁殖體系,對該樹種的遺傳改良研究和開展基因工程研究工作奠定良好的理論和技術(shù)基礎(chǔ)。
　　 本文以馬尾松幼胚、實(shí)生苗的幼嫩莖段為外植體,進(jìn)行器官發(fā)生和愈傷組織培養(yǎng)研究,探討了不同因素對器官發(fā)生或愈傷組織產(chǎn)生的影響。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.本研究分別采用了馬尾松幼胚和幼嫩莖段作為外植體,

2、在滅菌過程中,我們分別對它們進(jìn)行了不同的處理,并比較分析了它們各自的滅菌效果,結(jié)果表明:在兩種外植體的不同處理中,酒精在滅菌過程中作用比較顯著,滅菌時間過短,滅菌不徹底,外植體容易受到感染；滅菌時間過長,雖然滅菌效果好,但由于外植體比較幼嫩容易受到損傷,導(dǎo)致外植體死亡。在對馬尾松幼胚的滅菌過程中,最佳的消毒方法為:75％酒精表面滅菌30s,之后再用0.1％升汞浸泡8min,最后用無菌水沖洗5～6次；對馬尾松幼苗滅菌最好的方法是采用75％

3、的酒精浸泡20s,0.1％的升汞浸泡8min,最后用無菌水沖洗5～6次,其污染率和死亡率均最低,僅為3.71％。
　　 2.在馬尾松的直接器官發(fā)生的培養(yǎng)中,防治褐化的有效途徑是在培養(yǎng)基中添加0.15g/LVc,且兩天轉(zhuǎn)接一次,以縮短外植體在原來培養(yǎng)基上的停留時間,減少褐化的幾率。同時通過大量的比較分析,得出:在起始培養(yǎng)階段,WPM培養(yǎng)基中的萌發(fā)率高于培養(yǎng)基GD和DCR,且其生長狀況較好。BA、KT和NAA最適合的濃度水平分別為1

4、mg/L、0.5mg/L和0.15mg/L,NAA濃度過高使愈傷化程度加大。具體的來說,比較適合馬尾松叢芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基組合為WPM+1mg/L BA+0.5mg/L KT+0.15mg/L NAA+0.15g/L Vc；在叢生芽的增殖和伸長培養(yǎng)中,最適宜的培養(yǎng)基組合是WPM+0.15mg/L NAA+0.15g/L Vc+0.5g/L Ac；生根培養(yǎng)中,效果最好的培養(yǎng)基組合為WPM+2mg/L IBA+0.15mg/L NAA+0.5g

5、/L Ac,且生根培養(yǎng)基中添加蔗糖的濃,度以20g/L為宜。
　　 3.在馬尾松的愈傷組織培養(yǎng)過程中,細(xì)胞分裂素與生長素的配比對外植體脫分化形成愈傷組織,起著重要的調(diào)控作用。因此必須通過不斷調(diào)整各激素濃度之間的比例,以利于馬尾松愈傷組織的誘導(dǎo),本試驗(yàn)得出的誘導(dǎo)馬尾松愈傷組織最佳的培養(yǎng)基組合為GD+2.5mg/LNAA。同時,通過大量試驗(yàn)和研究分析發(fā)現(xiàn),NAA在馬尾松愈傷組織的誘導(dǎo)中起著主要的調(diào)控作用,缺少NAA,愈傷組織就很難形