鳳丹組織培養(yǎng)及培養(yǎng)條件對(duì)愈傷組織中丹皮酚含量的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、鳳丹(Paeonia ostii)為芍藥科芍藥屬多年生小灌木牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)品種,集藥、食、觀賞為一體,尤其以其根皮中丹皮酚具有良好的臨床應(yīng)用和開發(fā)價(jià)值。植物組織培養(yǎng)技術(shù)是獲得整齊一致材料的快捷途徑。國內(nèi)外對(duì)于牡丹組織培養(yǎng)的研究集中在觀賞型牡丹品種無菌試管苗的獲得上,針對(duì)牡丹(尤其是藥用品種)的生理生化研究鮮有報(bào)道。本研究以藥用品種鳳丹為研究材料,從愈傷組織培養(yǎng)的最佳外植體材料、消毒方式、培養(yǎng)

2、基配方以及根、芽誘導(dǎo)再生條件等多方面展開研究,為藥用品種牡丹的組織培養(yǎng)提供理論參考。同時(shí),以愈傷組織為材料,研究了外界不同銅濃度、激素配比、光質(zhì)條件、酚類物質(zhì)合成前體濃度等因素,探究了丹皮酚合成的影響因素,為丹皮酚的合成以及利用組織培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)丹皮酚提供理論基礎(chǔ)。
   1鳳丹組織培養(yǎng)
   對(duì)鳳丹不同外植體材料進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo),結(jié)果顯示:通過赤霉素處理獲得的幼嫩葉柄為愈傷組織誘導(dǎo)的最佳外植體材料;次氯酸鈉溶液作為消毒劑

3、的最佳濃度為2.5%,消毒時(shí)間為15-20min; MS、1/2MS、WPM這三種不同基本培養(yǎng)基下的褐化率沒有顯著差異,則選擇較低無機(jī)鹽離子濃度的基本培養(yǎng)基并不能有效的降低褐化率;添加1000 mg·L-1 PVP對(duì)防止褐化效果顯著,可以使褐化率降低為0%;愈傷組織誘導(dǎo)以及增殖的最優(yōu)培養(yǎng)基配方為:MS+BA1.0 mg·L-1+NAA0.2 mg·L-1+LH500mg·L-1+PVP1000 mg·L-1,其誘導(dǎo)率可達(dá)97%以上,增重

4、倍數(shù)為2.86;光照條件下愈傷組織增殖倍數(shù)顯著高于暗培養(yǎng);解偶聯(lián)劑DNP的添加顯著抑制愈傷組織的增殖生長,而添加Phe可以顯著提高愈傷組織的增殖倍數(shù),但不同濃度處理間差異不顯著。愈傷組織誘導(dǎo)芽的分化很難實(shí)現(xiàn),不同濃度配比的BA與NAA組合均未能成功誘導(dǎo)出芽。愈傷組織可以成功誘導(dǎo)出不定根,NAA是成功誘導(dǎo)不定根的關(guān)鍵因素。愈傷組織在NAA濃度為1.0mg·L-1或1.5mg·L-1時(shí)可以成功誘導(dǎo)出不定根,但是出根率很低。
   2

5、外界條件對(duì)愈傷組織丹皮酚含量的影響
   銅濃度:通過調(diào)整培養(yǎng)基中Cu2+濃度(0.00025、0.025、2.5、25 mg·L-1),研究了銅對(duì)鳳丹愈傷組織中丹皮酚含量的影響。結(jié)果顯示:丹皮酚含量及總量都隨著Cu2+濃度的升高而提高,除了兩個(gè)低濃度水平銅處理無顯著差異外,高濃度Cu2+處理下丹皮酚含量以及總量都顯著高于低濃度處理;對(duì)銅與丹皮酚含量進(jìn)行相關(guān)性分析,發(fā)現(xiàn)它們二者之間呈極顯著正相關(guān),即適量Cu2+添加可以有效促進(jìn)丹

6、皮酚的合成。
   光質(zhì):不同光質(zhì)下鳳丹愈傷組織中丹皮酚含量及總量的增加量從大到小的順序是:藍(lán)光>紅光>黑暗>熒光,除了藍(lán)光與紅光條件下培養(yǎng)差異不顯著外,其他各處理間差異顯著;熒光燈下培養(yǎng)后的愈傷組織中丹皮酚總量的變化量為負(fù)值,可見熒光燈下培養(yǎng)使丹皮酚進(jìn)行了分解,抑制了丹皮酚的合成。
   6-BA與NAA:以愈傷組織為材料,在含有不同濃度6-BA和NAA的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)10d,研究單因素6-BA和NAA以及二者交互作

7、用對(duì)丹皮酚含量的影響,結(jié)果顯示:單因素試驗(yàn)中,適當(dāng)提高6-BA或NAA濃度可以顯著提高丹皮酚含量,二者都是以濃度為1.0 mg·L-1時(shí)丹皮酚含量最高。在6-BA與NAA交互作用的所有處理組合中,以BA1.0 mg·L-1+NAA1.0 mg·L-1組合培養(yǎng)下的丹皮酚含量最高。
   DNP與Phe:0.2、0.5、1.0mmol·L-1濃度DNP處理4d明顯抑制了愈傷組織的生長,0.5、1.0mmol·L-1濃度DNP的添加使

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