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1、目的：構(gòu)建趨化因子受體CXCR4的特異RNA干擾載體，并檢測(cè)CXCR4的特異小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)對(duì)人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系(SHI-1)CXCR4 mRNA的影響，為進(jìn)一步研究該基因功能和以RNA干擾為手段的白血病基因治療打下基礎(chǔ)。 方法：根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)提供的CXCR4基因mRNA序列，按照Tusch1設(shè)計(jì)原則，選擇設(shè)計(jì)siRNA，再轉(zhuǎn)化為能轉(zhuǎn)錄短發(fā)夾狀RNA(sho
2、rt hairpin RNA，shRNA)的DNA序列，并與逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(pRNAT)連接，采用酶切、多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)和DNA測(cè)序方法進(jìn)行鑒定；陽(yáng)離子脂質(zhì)體(Lipofectamine 2000)介導(dǎo)的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染包裝病毒細(xì)胞(PT67)，收集病毒上清感染SHI-1細(xì)胞，經(jīng)G418篩選穩(wěn)定抑制CXCR4基因表達(dá)的SHI-1細(xì)胞株，應(yīng)用RT—PCR檢測(cè)細(xì)胞CXCR4 mRNA表
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