趨化因子受體CXCR4在結直腸癌中的表達及影響細胞遷移的研究.pdf

1、背景與目的：腫瘤是一個重要的公眾健康問題。在世界范圍內，結直腸癌是第3位的常見惡性腫瘤，結直腸癌預后差主要原因在于其復發(fā)和轉移。新近研究表明，趨化性細胞因子及其受體的相互作用可能在癌細胞的遷徙轉移過程中起著極其重要的作用。自第一個趨化因子于80年代末被確認以來，迄今已發(fā)現(xiàn)至少50種趨化因子。其中最令人矚目的是趨化因子受體CXCR4與其配體CXCL12的相互作用，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)趨化因子CXCL12及其受體CXCR4在胚胎發(fā)育，造血干細胞的遷移和各

2、種免疫反應中發(fā)揮重要作用,是許多生理和病理過程中指導細胞運動的中心因素。CXCR4并不是腫瘤特異性標記物,CXCR4作為趨化因子受體廣泛存在于許多正常組織，Muller報道了在大鼠模型中CXCR4與其配體CXCL12共同作用導致乳腺癌細胞轉移后，該趨化因子及其受體對腫瘤細胞轉移作用的影響受到廣泛重視。近年來發(fā)現(xiàn)其與腫瘤的生長，侵襲，轉移和分泌密切相關。目前研究發(fā)現(xiàn)趨化因子受體CXCR4在多種器官腫瘤中高表達,本研究著重從CXCR4分子在

3、臨床結直腸癌組織中的表達及其意義方面入手，同時研究趨化因子受體CXCR4在結直腸癌轉移等生物學行為中的作用。 方法：①評定CXCR4基因亞型在結直腸癌中的表達情況，同時利用半定量PCR分析該基因在結直腸正常組織與腫瘤組織中的表達情況。②收集結直腸癌患者腫瘤標本，利用組織芯片和免疫組織化學等技術手段，分析CXCR4 在49例結直腸癌組織中的表達情況。③利用結直腸癌細胞株為載體，采用實時定量PCR 及WESTERN blot蛋白印跡

4、法分析該趨化因子受體于基因與蛋白水平上在各種結直腸癌腫瘤細胞中的表達，篩選高表達的細胞株，同時行細胞功能實驗。 結果:1.CXCR4基因有兩個亞型,PCR 證實CXCR4A 在結直腸癌中幾乎不表達，而CXCR4B 在結直腸癌中相對高表達。2.利用實時定量PCR 分析CXCR4 在結直腸癌細胞中的表達情況，結果表明HT29細胞中CXCR4 表達量最高，HCT116 幾乎不表達，而SW480、SW620、LoVo、COLO205、C

5、aCO2、SW1116的表達介于以上二者之間。蛋白水平上，CXCR4蛋白在結腸直腸癌細胞株SW480、HT29、SW620、COLO205中表達較高,在SW11116和LoVo中表達較低,在HCT116和CaCO2中不表達。3.組織芯片的免疫組化染色顯示，CXCR4 在結腸直腸癌組織中（陽性率為71.4％）表達高于正常結腸直腸黏膜組織（陽性率為11.1％），差異具有統(tǒng)計學意義。在結腸直腸癌組織中，伴發(fā)淋巴結轉移者的CXCR4 表達明顯高

6、于未發(fā)生轉移者，差異具有統(tǒng)計學意義；同時，在不同的結腸直腸癌TNM 分期者中，Ⅲ期和Ⅳ期者CXCR4表達明顯高于Ⅰ期和Ⅱ期者，差異具有統(tǒng)計學意義,但CXCR4的表達與病人的年齡、性別、腫瘤細胞分化程度及腫瘤發(fā)生部位無相關性。4.轉染CXCR4 SiRNA 后明顯抑制CXCR4基因的表達，經(jīng)CXCR4 SiRNA 作用的SW480細胞，經(jīng)Transwell 小室遷移試驗后，CXCR4 SiRNA組轉移細胞數(shù)目均低于陰性siRNA組和對照組