趨化因子受體CXCR4在大腸癌轉(zhuǎn)移中作用的研究.pdf

1、背景轉(zhuǎn)移既是惡性腫瘤的重要特征，也是惡性腫瘤難以治愈、導(dǎo)致患者死亡而亟待解決的關(guān)鍵問題。目前發(fā)現(xiàn)趨化因子受體不僅高表達于免疫細胞，在某些腫瘤細胞同樣也存在高表達。Muller于2001年首先闡述了趨化因子受體與乳癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系，揭示趨化因子受體與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。趨化因子受體CXCR4(CXCchemokinereceptor4，CXCR4)是組織表達最為廣泛的趨化因子受體之一，在多種惡性腫瘤細胞的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移中都有很重要的作用。CX

2、CR4在腫瘤組織中的表達明顯高于正常組織，而腫瘤常見轉(zhuǎn)移部位均為CXCR4的配體基質(zhì)細胞衍生因子-1(stromalcellderivedfactor-1，SDF-1)表達豐富的器官，SDF-1與CXCR4結(jié)合后可使細胞肌動蛋白絲聚合，形成偽足，從而定向誘導(dǎo)腫瘤細胞遷移到特定的靶器官；此外，CXCR4與其配體SDF-1相互作用可以促進局部新生血管作用，利于腫瘤生長。因此，趨化因子受體CXCR4已成為研究抗腫瘤藥物的極具吸引力的新靶點。

3、 目的1.探討CXCR4在大腸癌組織中的表達及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移等臨床病理特征的關(guān)系。 2.探討CXCR4在三種大腸癌細胞中的表達及其對大腸癌細胞趨化遷移和增殖作用的影響。 3.探討小干擾RNA對大腸癌細胞SW480細胞CXCR4表達和遷移的抑制作用。 方法1.對63例大腸癌病例進行回顧，以免疫組化SP法分別檢測63例大腸癌組織、25例大腸癌癌旁正常組織、17例肝轉(zhuǎn)移灶和15例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中CXCR4的

4、表達，分析CXCR4的表達與大腸癌不同臨床病理參數(shù)的關(guān)系，研究大腸癌CXCR4的表達與淋巴結(jié)、肝臟轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 2.以逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測三種大腸癌細胞株SW480細胞、SW620細胞、Lovo細胞mRNA表達；以Western蛋白印跡檢測三種大腸癌細胞株CXCR4蛋白表達；以流式細胞儀(FACS)分析三種大腸癌細胞株細胞表面CXCR4表達；體外細胞遷移實驗檢測三種大腸癌細胞株遷移和運動性變化，研究大腸癌細胞

5、CXCR4的表達與其遷移能力的關(guān)系，MTT法檢測SDF-1對三種大腸癌細胞的增殖作用。 3.設(shè)計互補于CXCR4mRNA的小干擾RNA(smallinterferingRNA，siRNA)，以脂質(zhì)體LipofectinAMINE2000包埋后轉(zhuǎn)染人大腸癌細胞SW480，以逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測轉(zhuǎn)染后人大腸癌細胞SW480CXCR4mRNA表達的變化；以Western蛋白印跡檢測CXCR4蛋白表達的變化；以細胞遷

6、移實驗檢測大腸癌細胞SW480遷移能力的變化。 結(jié)果1.在所有63例腫瘤組織標(biāo)本中，CXCR4表達陰性3例(4.7％)，弱陽性7例(11.1％)，陽性17例(27％)，強陽性36例(57.2％)，染色主要在細胞質(zhì)內(nèi)，小部分標(biāo)本細胞膜也有少量染色。CXCR4在大腸癌中的表達與年齡、性別、組織學(xué)類型、分化程度均無明顯相關(guān)性，與Duke's(P＜0.01)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P＜0.01)、肝臟轉(zhuǎn)移(＜0.01)明顯相關(guān)。25例大腸癌癌旁正

7、常組織中，CXCR4表達陰性17例(68％)，弱陽性8例(32％)。17例肝轉(zhuǎn)移灶中CXCR4的表達均呈強陽性。15例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，CXCR4表達陽性4例(26.7％)，強陽性11例(73.3％)。 2.逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、Western蛋白印跡法及流式細胞儀分析大腸癌細胞SW480、SW620及Lovo的CXCR4表達均呈陽性。三種方法檢測結(jié)果一致，其中大腸癌細胞SW480和SW620CXCR4高表達，大腸

8、癌細胞LovoCXCR4低表達。體外遷移實驗提示SDF-1能趨化大腸癌細胞SW480和SW620發(fā)生明顯體外遷移(P＜0.01)，而大腸癌細胞Lovo體外遷移無明顯變化(P＞0.05)。SDF-1對大腸癌細胞SW480和SW620有明顯的增殖作用(P＜0.01)，而對大腸癌細胞Lovo無明顯增殖作用(P＞0.05)。 3.CXCR4-siRNA對SW480細胞CXCR4mRNA和蛋白表達及細胞遷移力均有明顯抑制作用(P＜0.01

9、)，其抑制效應(yīng)在不同濃度組問差別顯著(P＜0.01)。CXCR4-siRNA在終濃度為50nmol/L、100nmol/L和200nmol/L時對SW480細胞的遷移抑制率分別為20.5％、37.5％和52.9％。 結(jié)論CXCR4的上調(diào)表達可能參與了大腸癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。大腸癌細胞CXCR4表達水平與其遷移能力呈正相關(guān)，并且SDF-1對CXCR4高表達的大腸癌細胞有明顯的增殖作用。小干擾RNA通過下調(diào)CXCR4mRNA和蛋白的表達