大鼠慢傳輸型便秘模型的建立及其發(fā)病機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的:慢傳輸型便秘(Slow transit constipation ,STC)是一種常見(jiàn)的以腸動(dòng)力障礙為特征的臨床疾病,隨著人們生活水平的提高、工作節(jié)奏的加快,發(fā)病率逐年上升.由于臨床上難以對(duì)便秘患者進(jìn)行前瞻性研究,因而對(duì)其病因及發(fā)病機(jī)制缺乏深入的認(rèn)識(shí),如何建立一種制作簡(jiǎn)單、可重復(fù)性強(qiáng)、符合臨床特點(diǎn)的慢傳輸型便秘動(dòng)物模型,對(duì)深入研究慢傳輸型便秘的病因、發(fā)病機(jī)制及轉(zhuǎn)歸具有重要意義.因此,該研究擬應(yīng)用復(fù)方苯乙哌啶建立一種大鼠慢傳輸型便秘

2、模型,通過(guò)研究慢傳輸型便秘模型大鼠結(jié)腸肌電、結(jié)腸肌間神經(jīng)叢內(nèi)多種神經(jīng)成分及腸神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)Cajal間質(zhì)細(xì)胞(ICC)的變化,探討慢傳輸型便秘的發(fā)生機(jī)制.方法:健康Wistar大鼠74只,分2期進(jìn)行實(shí)驗(yàn).第 1期42只,隨機(jī)分7組,每組6只,篩選藥物劑量;第2期32只,隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組,每組16只,根據(jù)所選藥物劑量,建立大鼠慢傳輸型便秘模型.120天后,采用活性炭灌胃法測(cè)定腸道傳輸速度,同時(shí)進(jìn)行結(jié)腸肌電檢測(cè).然后處死大鼠,取近側(cè) (距

3、盲腸約1cm)及遠(yuǎn)側(cè) (距肛門約2cm) 的結(jié)腸進(jìn)行HE染色;對(duì)結(jié)腸肌間神經(jīng)叢標(biāo)本,采用組織化學(xué)染色法,顯示大鼠結(jié)腸肌間神經(jīng)叢內(nèi)AchE能神經(jīng)和NOS能神經(jīng);采用免疫組織化學(xué)技術(shù)在鋪片上顯示大鼠結(jié)腸肌間神經(jīng)叢內(nèi)VIP能神經(jīng)和SP能神經(jīng);碘化鋅-鋨酸(ZIO)染色顯示大鼠結(jié)腸神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)ICC的病理改變.結(jié)果:(1)模型組大鼠腸道傳輸速度與對(duì)照組相比明顯減慢,首粒黑便排出時(shí)間為356±50min,較對(duì)照組大鼠顯著延長(zhǎng)(249±35min,p

4、﹤0.01).(2)模型組大鼠結(jié)腸慢波出現(xiàn)雙向改變,部分大鼠結(jié)腸慢波頻率明顯減慢(5.55±1.20次/min vs 對(duì)照組13.20±1.09次/min,p﹤0.01),振幅增加(0.43±0.05 mv vs 對(duì)照組0.19±0.02 mv,p﹤0.01),波形仍表現(xiàn)為不規(guī)則的近似正弦波樣曲線;部分大鼠結(jié)腸慢波頻率出現(xiàn)快速性改變(30.85±3.86次/min vs對(duì)照組13.20±1.09次/min,p﹤0.01),振幅強(qiáng)弱不等(

5、0.21±0.03 mv vs對(duì)照組0.19±0.02 mv,p﹤0.01),波形較不穩(wěn)定,且出現(xiàn)基線位移.(3)結(jié)腸切片HE染色發(fā)現(xiàn)模型組大鼠均顯示粘膜慢性炎癥改變.(4)結(jié)腸肌間神經(jīng)叢鋪片組化染色發(fā)現(xiàn)模型大鼠結(jié)腸肌間神經(jīng)叢內(nèi)膽堿能神經(jīng)分布較稀疏,數(shù)量較少,但胞體增大,染色加深(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)14.34±4.56 vs 對(duì)照組27.56±6.64,p﹤0.01;核漿比例0.57±0.20 vs 對(duì)照組0.76±0.18,p﹤0.01);氮

6、能神經(jīng)元分布較稀疏,數(shù)量較少,染色深淺不一,節(jié)間纖維較細(xì)小,染色較淡(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)7.10±2.04 vs 對(duì)照組11.16±2.81,p﹤0.01;弱陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)2.21±1.38 vs對(duì)照組0.84±0.67,p﹤0.01).(5)免疫組化染色發(fā)現(xiàn)模型大鼠VIP陽(yáng)性神經(jīng)節(jié)及節(jié)間束細(xì)小,節(jié)內(nèi)神經(jīng)元數(shù)量明顯減少,神經(jīng)束內(nèi)神經(jīng)纖維分布稀疏,陽(yáng)性神經(jīng)元胞體少見(jiàn)(平均面密度值19.35±1.13vs對(duì)照組23.08±1.82,p﹤0.01);SP

7、陽(yáng)性神經(jīng)節(jié)明顯增大,神經(jīng)束增粗,神經(jīng)元和神經(jīng)纖維明顯增多,免疫反應(yīng)性增強(qiáng)(平均面密度值18.14±1.18 vs對(duì)照組15.45±1.05,p﹤0.01).(6)ZIO染色顯示便秘大鼠結(jié)腸神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)ICC分布不均勻,有的視野ICC密集,突起連接雜亂,有的視野ICC稀少,突起不能相互連接形成網(wǎng)絡(luò).結(jié)論:1.成功建立了大鼠慢傳輸型便秘模型,該模型簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì),可重復(fù)性強(qiáng).2.慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸肌間神經(jīng)叢存在明顯的神經(jīng)病理學(xué)改變,結(jié)腸傳輸功能障