東方蜜蜂微孢子蟲在浙江省西方蜜蜂中的流行性調(diào)查及其防治研究.pdf

1、養(yǎng)蜂業(yè)不僅是畜牧業(yè)的重要組成部分，在提高農(nóng)作物產(chǎn)量和質(zhì)量以及維護(hù)生物多樣性等方面也發(fā)揮重要作用。然而，近年來(lái)，世界養(yǎng)蜂業(yè)形勢(shì)普遍嚴(yán)峻，許多歐美養(yǎng)蜂國(guó)家蜂群嚴(yán)重衰退，不僅給蜂農(nóng)造成巨大損失，也引起人們對(duì)授粉危機(jī)的擔(dān)憂。東方蜜蜂微孢子蟲（Nosema ceranae）是一種以專營(yíng)成年蜜蜂腸道細(xì)胞為主的寄生蟲，通過(guò)吸取蜜蜂的營(yíng)養(yǎng)和能量，實(shí)現(xiàn)其在蜜蜂體內(nèi)的大量繁殖。作為西方蜜蜂(Apis melliferaL.)的一種新型病原，N.cerana

2、e嚴(yán)重威脅西方蜜蜂健康。該病原不僅破壞蜜蜂腸道組織、影響蜜蜂正常的消化道功能，降低蜜蜂的免疫力，促使蜜蜂采集行為提前，同時(shí)也會(huì)為其他病原菌的入侵提供可乘之機(jī)，最終使蜜蜂壽命縮短，蜂群群勢(shì)下降。
　　研究發(fā)現(xiàn)，在我國(guó)，N.ceranae已基本取代（西方）蜜蜂微孢子蟲(Nosemaapis)。然而，關(guān)于N.ceranae在我國(guó)西方蜜蜂中的流行病學(xué)研究較少。浙江省是我國(guó)主要的養(yǎng)蜂大省之一，由N.ceranae在西方蜜蜂中引起的蜜蜂孢子蟲

3、病在浙江尚未有系統(tǒng)的研究。此外，我國(guó)目前缺乏防治N.ceranae的有效且安全藥物。因此，為了明確N.ceranae在浙江省西方蜜蜂中的流行情況和危害，開發(fā)出有效防治蜜蜂孢子蟲病的藥物，本課題于2013年4月至2016年1月對(duì)浙江省西方蜜蜂蜂群中N.ceranae的流行情況進(jìn)行定期調(diào)查，并結(jié)合歐盟利用植物制劑防治蜜蜂孢子蟲病和我國(guó)防治其他動(dòng)物孢子蟲病的經(jīng)驗(yàn)，篩選有效抑制孢子增殖的植物提取物。研究?jī)?nèi)容和主要結(jié)果如下:
　　1.N.c

4、eranae在浙江省西方蜜蜂蜂群中的流行情況
　　(1)2013年4月至2016年1月，從浙江省8個(gè)縣、市地區(qū)19家定地蜂場(chǎng)采集的701份樣品用于蜜蜂微孢子蟲種類的鑒定及其孢子量的檢測(cè)。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，目前感染浙江省西方蜜蜂的微孢子蟲主要為N.ceranae，未檢出N.apis。
　　(2)在2013年至2016年的不同季度中，8個(gè)地區(qū)19家蜂場(chǎng)均有N.ceranae感染。在701群蜜蜂中，有74％的蜂群感染N.ceranae，其

5、中，以中等感染水平為主(58％);嚴(yán)重感染率為0;輕微感染率為16％。
　　(3)從季節(jié)性感染情況看，N.ceranae在浙江省不同地區(qū)西方蜜蜂蜂群中全年感染，且春、夏兩季感染水平普遍相對(duì)偏高，平均感染率都在85％以上。N.ceranae在秋、冬兩季的感染率相對(duì)較低，但也均在50％以上。
　　(4)自2014年3月起，金華地區(qū)N.ceranae的總體平均感染率逐漸升高，并以中等感染水平為主。其中，DJH、WFH和ZGQ等3家

6、蜂場(chǎng)全年嚴(yán)重感染N.ceranae;盡管CWC蜂場(chǎng)在2014年3月至2014年12月期間均未檢出N.ceranae，但自2015年4月起，N.ceranae的感染水平顯著增加。
　　(5)平湖地區(qū)不同季度N.ceranae的總體感染水平季度差異不顯著，但均以中等感染水平為主?？傮w上，5家蜂場(chǎng)N.ceranae的平均感染率均在80％左右，但冬季的感染水平略低。
　　2.植物提取物防治蜜蜂孢子蟲病的效果
　　(1)實(shí)驗(yàn)室條

7、件下，采用1％濃度研究11味植物提取物防治蜜蜂孢子蟲病的效果。結(jié)果表明，穿心蓮水煎劑、葡萄皮醇提物以及黃柏水煎劑均能有效抑制N.ceranae孢子的增殖。
　　(2)采用0.5～7％之間不等的5個(gè)濃度探究3種有效植物提取物抑制孢子增殖的劑量效應(yīng)。結(jié)果表明，穿心蓮水煎劑和黃柏水煎劑對(duì)孢子增殖的抑制具有顯著的劑量效應(yīng)(p＜0.05)，濃度越高，其抑制孢子增殖的效果越好。5個(gè)不同濃度的葡萄皮醇提物均能顯著降低患病蜜蜂體內(nèi)的孢子數(shù)，但劑量

8、效應(yīng)不顯著(p＞0.05)。
　　3.穿心蓮水提物對(duì)蜜蜂健康的影響
　　通過(guò)初篩和劑量效應(yīng)研究發(fā)現(xiàn)，穿心蓮水煎劑不僅能有效抑制孢子增殖，且對(duì)蜜蜂安全。因此，我們從蜜蜂壽命水平和腸道穩(wěn)態(tài)（組織形態(tài)水平以及分子水平）探討7％穿心蓮水煎劑對(duì)蜜蜂健康的影響，并對(duì)穿心蓮水煎劑及其有效成分單體抑制孢子的效果進(jìn)行比較。研究結(jié)果表明:
　　(1)穿心蓮水煎劑能顯著提高感染N.ceranae的蜜蜂存活率(p＜0.05)。
　　(2

9、)與感染N.ceranae且不給藥的蜜蜂相比，感染N.ceranae的蜜蜂在給飼穿心蓮水煎劑后，其中腸組織更加致密、完整。這表明，穿心蓮水煎劑促進(jìn)了患病蜜蜂腸道組織的修復(fù)。此外，無(wú)論是患病蜜蜂還是健康蜜蜂，在飼喂7％穿心蓮水煎劑后，其中腸組織中再生細(xì)胞數(shù)目明顯增多，這表明穿心蓮水煎劑能促進(jìn)蜜蜂腸道細(xì)胞的更新。
　　(3)穿心蓮水煎劑通過(guò)促進(jìn)armadillo、basket以及frizzled等3個(gè)基因的上調(diào)表達(dá)，并抑制grouch