河南省豬、羊畢氏微孢子蟲病分子流行病學調查及遺傳特征初步研究.pdf

1、微孢子蟲是一類廣泛分布于自然界專性細胞內寄生的真核原生動物，能感染多種宿主，包括無脊椎動物和脊椎動物，是一類人獸共患性疾病病原。它包括1400多種，分別被劃入150多個屬，其中至少8個屬14種微孢子蟲能感染人。20世紀80年代以來，隨著 AIDS廣泛流行，微孢子蟲被認為是一種重要的條件性致病菌。微孢子蟲可以感染免疫功能缺陷者和免疫功能正常者，免疫力正常的人和動物感染微孢子蟲后表現(xiàn)為一過性癥狀，或呈隱性感染；免疫力低下的病人、免疫功能抑制

2、者、免疫缺陷患者尤其是AIDS患者感染后會引起致死性腹瀉，是艾滋病患者的主要致死因素之一。此外，微孢子蟲還可引起角膜炎，腦炎，心肌炎、泌尿系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)等疾病。微孢子蟲病作為一種新發(fā)傳染病已引起世界范圍的公共衛(wèi)生問題，被美國國立過敏和傳染性疾病研究院列入第二類具有潛在危險的微生物名單。為了解我省部分地區(qū)豬、羊畢氏微孢子蟲病的流行情況，為微孢子蟲病的防治及今后的研究提供參考依據(jù)，對我省部分地區(qū)的豬、羊群進行了畢氏微孢子蟲感染情況調查及分子

3、特征的初步研究。
　　1、為了解我省部分地區(qū)豬腸道寄生蟲病的感染及危害情況，科學地制定防治計劃，合理指導動物腸道寄生蟲病的防治工作，于2013年5月—2013年9月對河南省7個地區(qū)(鄭州金水區(qū)、輝縣、原陽、漯河召陵區(qū)、西華、信陽羅山縣、中牟)及四川北川等地采集462份樣品，應用盧戈氏碘液染色法、飽和蔗糖溶液漂浮法和麥克馬斯計數(shù)法等方法對所有樣品進行檢查，結果285份樣品查到不同種寄生蟲感染，總感染率為61.93％；共查到球蟲、隱孢

4、子蟲、賈第蟲、鞭蟲、圓線蟲、蛔蟲、結腸小袋纖毛蟲、阿米巴等8種(類)腸道寄生蟲，其中阿米巴感染率最高，為44.81%；且球蟲感染強度在<200-4600,圓線蟲的感染強度在<200-600。
　　2、為了解河南省部分地區(qū)豬畢氏微孢子蟲的感染情況及分子特征，用巢氏PCR技術對462份糞便樣品進行檢測。結果檢出120份陽性樣品，感染率為25.97%，基因片段長392bp。不同年齡的豬及不同飼養(yǎng)方式飼喂的豬，微孢子蟲感染率都存在差異，不

5、同年齡階段的感染率順序為：育肥豬(24.07%)、母豬(21.13%)、保育豬(18.52%)、乳豬(12.90%)、公豬(8.33%)；小專業(yè)戶感染率(42.15%)高于散養(yǎng)(16.08%)高于規(guī)模化(3.13%)。河南省中牟畢氏微孢子蟲的感染率最高56.41%。將陽性樣品測序、BLAST比對后，得到6個序列，在Genbank下載得到的6個序列，應用Clustal X1.81、Phyloip3.64、DNAstar4.0等生物信息學軟

6、件對12個序列進行比對、同源性分析及構建分子發(fā)育進化樹，最后顯示結果，豬感染五個基因型的畢氏微孢子蟲，分別為：F(26.47%)、PigEBITS5(2.94%)、EbpD(2.94%)、Type IV(2.94%)、EbpC(E、Peru4、WL13)(61.76%)，其中、EbpC、Type IV基因型也在人類中發(fā)現(xiàn)，有人畜共患的潛在風險，還有一個新的基因型，它與人源性基因型Typeⅳ關系最近，有一個堿基的差異，同源性為99.7%。

7、
　　3、為了解河南省部分地區(qū)羊畢氏微孢子蟲的感染情況及分子特征，用巢氏PCR技術對802份糞便樣品進行檢測。結果檢出74份陽性樣品，感染率為9.23%，基因片段長392bp。不同飼養(yǎng)方式、不同品種、年齡的羊及不同季節(jié)的羊，微孢子蟲感染率存在差異，綿羊感染率(6.93%)低于山羊(12.35%)；幼齡羊感染率(10.34%)高于成年羊(7.62%)；7-9月羊感染率(12.84%)高于10-12月羊(4.92%)；放牧羊感染率(1

8、3.99%)高于舍飼羊(6.59%)。將陽性樣品測序、BLAST比對后，得到6個序列，在Genbank下載得到的6個序列，應用Clustal X1.81、Phyloip3.64、DNAstar4.0等生物信息學軟件對12個序列進行比對、同源性分析及構建分子發(fā)育進化樹，最后顯示結果，羊感染五個基因型的畢氏微孢子蟲分別為：BEB6(83.8%)、EbpC/E/Peru4/WL13(9.46%)、D(2.70%)、其中EbpC、D基因型也在人