L型鈣通道阻滯劑對(duì)哮喘氣道平滑肌重塑及STAT6、SM-α-actin的影響研究.pdf

1、目的：通過(guò)卵蛋白誘發(fā)大鼠慢性哮喘氣道重塑模型，探討L型鈣離子通道阻滯劑非洛地平對(duì)氣道平滑肌細(xì)胞(airway smooth muscle cell ASMC)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白和轉(zhuǎn)錄激活因子6(Signal transducer and activator of transcription 6 STAT6)、α平滑肌肌動(dòng)蛋白(smooth muscle α-actin SM-α-actin)表達(dá)量的影響，探索哮喘ASMC內(nèi)STAT6、SM-α

2、-actin與哮喘氣道炎癥及重塑的病理機(jī)制。 方法：(1)對(duì)象和干預(yù)措施：卵蛋白誘發(fā)大鼠慢性哮喘氣道重塑模型：雄性SD大鼠30只，40±天齡，平均體重為150-200g，按隨機(jī)數(shù)字法分為三組，分別為對(duì)照組(A組，10只)、哮喘組(B組，10只)、處理組(C組，10只)。B組和C組于第1天行10％卵蛋白氫氧化鋁混合液腹腔注射致敏，A組給予生理鹽水腹腔注射，于第15天起對(duì)B組和C組行1％卵蛋白霧化吸入激發(fā)，每天激發(fā)一次，每次30分鐘

3、，A組以生理鹽水替代卵蛋白霧化，C組每次霧化前30分鐘給予鈣通道阻滯劑(calcium channel blocker CCB)非洛地平0.5mg/200g灌胃，進(jìn)行4周干預(yù)。(2)觀察指標(biāo)：肺標(biāo)本進(jìn)行組織病理學(xué)檢查，對(duì)組織切片采用HE染色，對(duì)炎癥改變的組織進(jìn)行觀察并對(duì)肺泡炎癥程度評(píng)分，計(jì)算機(jī)病理圖像分析系統(tǒng)測(cè)定不含軟骨的完整氣管橫斷面，測(cè)定參數(shù)包括內(nèi)周長(zhǎng)(perimeter of internal wall，Pi)支氣管壁面積(are

4、a of airway wall，WA)、支氣管平滑肌面積(area of airway smooth muscle，WAm)、支氣管平滑肌細(xì)胞核數(shù)(number,N)，將測(cè)得的3個(gè)值用管腔的內(nèi)周長(zhǎng)(Pi)，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，分別代表支氣管壁厚度(WA/Pi)、支氣管平滑肌層厚度(WAm/Pi)，支氣管平滑肌細(xì)胞核數(shù)(N/Pi)。免疫組織化學(xué)法顯示肺組織STAT6、SM-α-actin的原位表達(dá)，通過(guò)對(duì)陽(yáng)性反應(yīng)物積分光密度(integralo

5、ptical density,IOD)值測(cè)定，間接反應(yīng)STAT6、SM-α-actin表達(dá)量，通過(guò)觀察哮喘大鼠肺組織炎癥反應(yīng)及氣道重塑相關(guān)數(shù)值，探討CCB對(duì)哮喘大鼠模型的干預(yù)作用。(3)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，所得數(shù)據(jù)采用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，統(tǒng)計(jì)方法為單因素方差分析，最小顯著差異法(LSD法)進(jìn)行不同組別之間的兩兩比較，以P<0.05作為顯著界限。 結(jié)果：(1)哮喘癥狀多在激發(fā)5分鐘內(nèi)發(fā)生，

6、均表現(xiàn)為輕度，A組激發(fā)率0(0/10)，B組、C組分別為80％(8/10)、50％(5/10)，兩組比較有顯著差異性(p<0.01)。(2)肺組織切片}玎巳染色及光鏡觀察：A組細(xì)小支氣管及伴行小動(dòng)脈、肺泡結(jié)構(gòu)正常。B組支氣管痙攣明顯，管腔縮窄，支氣管黏膜增厚，皺襞增多，部分上皮細(xì)胞脫落，肺泡間隔增厚，氣道平滑肌明顯增厚，支氣管壁和伴行動(dòng)脈周?chē)休^多嗜酸粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸。C組炎癥反應(yīng)較輕，支氣管旁炎性細(xì)胞及肺泡腔內(nèi)分

7、泌物明顯減少，支氣管平滑肌增厚及管腔狹窄變形均較B組明顯減輕。(3)支氣管壁厚度、支氣管平滑肌厚度兩個(gè)指標(biāo)上，哮喘組較對(duì)照組明顯增厚，處理組和哮喘組比較，處理組厚度減輕，結(jié)果有顯著差異性(P<0.01)，支氣管平滑肌細(xì)胞核數(shù)：哮喘組和對(duì)照組比較數(shù)值增加，結(jié)果有差異性(P<0.01)，處理組和哮喘組比較數(shù)值減少，結(jié)果有差異性(P<0.01)，(4)免疫組織化學(xué)染色：哮喘氣道壁STAT6多量表達(dá)于粘膜下層平滑肌細(xì)胞漿及細(xì)胞核中，對(duì)照組氣道壁

8、有少量表達(dá)，IOD值A(chǔ)組和B組比較，B組顯著升高，結(jié)果有顯著差異性(p<0.01)B組和C組比較，C組數(shù)值減少，結(jié)果有顯著差異性(p<0.01)；SM-α-actin特異表達(dá)在ASMC胞漿中，IOD值A(chǔ)組和B組比較，B組表達(dá)量明顯增多，結(jié)果有顯著差異性(P<0.01)，B組和C組比較，C組表達(dá)量減少，結(jié)果有差異性(P<0.05)。 結(jié)論：(1)卵蛋白4周激發(fā)致敏SD大鼠可建立慢性哮喘氣道重塑模型。(2)慢性哮喘大鼠氣道壁粘膜下層