槲皮素對(duì)血管平滑肌細(xì)胞電壓依賴型鈣通道的影響.pdf

1、目的: 觀察槲皮素（Quercetin，Que）對(duì)人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（human umbilical artery smooth muscle cell，HUASMC）L型和T型電壓依賴型鈣通道（voltage-dependent calcium channel，VDCC）的影響，為槲皮素抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用提供理論依據(jù)。 方法: 1.人臍動(dòng)脈組織貼塊法培養(yǎng)HUASMC，α-Smooth Muscle Actin

2、免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定，于2-3代用于試驗(yàn)： 2.分組：培養(yǎng)的HUASMC胰酶消化脫壁后，充分混合，隨機(jī)分為3組。 對(duì)照組：不加入任何藥物； 模型組：加入100nmol/L的內(nèi)皮素-1（endothelin-1；ET-1）[12]； 實(shí)驗(yàn)組：加入100nmol/L的ET-1和200mmol/L的槲皮素[3]； 3.加藥后6、12、24小時(shí)以逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（Reverstranscription-

3、polymerase，RT-PCR）分別檢測(cè)L型鈣通道和T型鈣通道蛋白的主要亞基α1C和α1G的mRNA表達(dá)。 4.加藥后22小時(shí)抗α1C免疫染色各組細(xì)胞，檢測(cè)熒光強(qiáng)度。 5.加藥后22小時(shí)抗α1G檢測(cè)各組蛋白的免疫印跡（western blot） 6.加藥后22小時(shí)全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測(cè)各組L型鈣通道電流和T型鈣通道電流。 結(jié)果: 1.RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞α1C和α1G mRNA的表達(dá)：各組α1G

4、的mRNA表達(dá)水平在加藥后12小時(shí)差異最顯著，α1G mRNA的表達(dá)水平最高，試驗(yàn)組次之，空白對(duì)照組最低，各組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；各組α1CmRNA表達(dá)水平的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。 2、免疫熒光法檢測(cè)α1C蛋白表達(dá)：熒光顯微鏡下觀察，各實(shí)驗(yàn)組的綠色熒光強(qiáng)度明顯高于陰性對(duì)照組；各實(shí)驗(yàn)組的熒光強(qiáng)度無(wú)差異，單位面積的OD值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。 3、免疫印跡法檢測(cè)α1G蛋白表達(dá)：模

5、型組α1G蛋白的表達(dá)水平最高，試驗(yàn)組次之，空白對(duì)照組最低。各組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。 4、電生理實(shí)驗(yàn)：模型組和試驗(yàn)組L型鈣通道的最大電流密度值均小于對(duì)照組（p<0.01），但兩者之間沒(méi)有顯著差異（p>0.05），；模型組T型鈣通道的最大電流密度最大，試驗(yàn)組次之，空白組最小，各組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01）。 結(jié)論: 1、槲皮素能夠抑制ET-1所致體外培養(yǎng)HUASMC中α1G表達(dá)的增強(qiáng)。