基因芯片技術(shù)研究莪術(shù)不同成分對(duì)HSC-T6細(xì)胞基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的:研究制備含有50個(gè)肝纖維化相關(guān)基因的寡核苷酸芯片,以HSC-T6為模式細(xì)胞系,開展莪術(shù)4種不同成分(莪術(shù)油、莪術(shù)醇、β-欖香烯、姜黃素)對(duì)HSC-T6細(xì)胞基因表達(dá)的影響的研究,從分子水平探索中藥莪術(shù)的抗肝纖維化作用機(jī)理.方法:從基因庫(kù)中查詢TGFβ1、PDGF、IL-6、IL-10、HGF、ICAM-1、MIP-2、TGF β R Ⅰ、TGF β R Ⅱ、PDGFR α、PDGFR β、TNF α R1、MMP2、TIMP-1等5

2、0種肝纖維化相關(guān)基因(包括看家基因)的mRNA序列,用寡核苷酸探針設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)探針,在PEg909DNA合成儀上合成寡核苷酸,用Genemachines公司的OGR-04點(diǎn)樣儀及醛基化玻片進(jìn)行點(diǎn)片,制備成基因芯片.以不同濃度含藥(秋水仙堿、莪術(shù)油、莪術(shù)醇、β-欖香烯、姜黃素)培養(yǎng)液培養(yǎng)HSC-T6細(xì)胞.根據(jù)細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn),確定細(xì)胞存活率在50％以上的藥物濃度作為實(shí)驗(yàn)所用濃度,每組設(shè)空白對(duì)照,分別按1h、6h、12h、24h 4個(gè)時(shí)間段收集

3、細(xì)胞.以Trizol試劑按說(shuō)明書推薦的操作步驟提取細(xì)胞總RNA,經(jīng)反轉(zhuǎn)錄熒光標(biāo)記、雜交和洗滌,用掃描儀Genepix 4000B掃描芯片,ImaGene 4.2軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和歸一化處理,使用看家基因和陽(yáng)性對(duì)照對(duì)Cy3和Cy5掃描結(jié)果進(jìn)行校正,分析莪術(shù)不同成分(莪術(shù)油、莪術(shù)醇、β-欖香烯、姜黃素)對(duì)HSC-T6細(xì)胞基因表達(dá)的差異.結(jié)果:秋水仙堿6.25μg/ml作用HSC-T6細(xì)胞12小時(shí),可使基因TIMP-1表達(dá)下調(diào)2.2倍;莪術(shù)油