抗纖軟肝顆粒對大鼠肝星狀細胞核仁非組蛋白的影響.pdf

1、目的：
　　 從蛋白質的調控水平研究抗纖軟肝顆粒(KXRG)對肝星狀細胞(HSC)增殖的調控機制，進一步探討KXRG抗肝纖維化的作用機制，從而進一步闡明中藥抗肝纖維化的藥理學機制和作用靶點，為研制新型抗肝纖維化藥物提供理論基礎。
　　 方法：
　　 采用活化的肝星狀細胞系(HSC-T6)培養(yǎng)傳代，然后分別加入中藥KXRG(1.25mg/m1、2.5mg/m1、5mg/m1)及其大鼠含藥血清(5％、10％、20％)

2、進行培養(yǎng)，并設空白對照組。72小時后，各組取部分細胞用流式細胞儀檢測HSC各周期DNA含量，并用電子顯微鏡觀察其超微結構變化，研究KXRG對HSC細胞周期的影響；同時，另部分細胞進行細胞核蛋白提取，利用免疫蛋白印跡法(Western blot)觀察用藥后HSC核仁非組蛋白(B23、C23)活性水平的變化，探討KXRG在蛋白質表達水平對活化HSC的調控作用。
　　 結果：
　　 1.KXRG及其含藥血清對活化的HSC增殖的

3、影響 MTT的結果顯示KXRG及其含藥血清各濃度組均能抑制活化的HSC增殖，且含藥血清組明顯優(yōu)于藥物組(P＜0.01)；各藥物組及含藥血清組均優(yōu)于其對照組(P＜0.01，P＜0.05)，且2.5mg/m1藥物組分別與1.25mg/m1、5mg/ml藥物組比較有差異(P＜0.01，P＜0.05)；10％含藥血清組分別與5％、20％含藥血清組比較有明顯差異(P＜0.01)。
　　 2.KXRG及其含藥血清對活化的HSC細胞周期的影響

4、應用流式細胞儀測得各組細胞在不同細胞周期的DNA含量，結果顯示不同濃度含藥血清組及藥物組作用于細胞72h后，隨濃度的增加G0/G1期細胞含量逐漸增加，均與對照組比較有差異(P＜0.05，P＜0.01)，而S期和G2/M期細胞含量則逐漸減少。表明KXRG能阻止細胞由G0/G1期進入S期，但對于G2/M期影響不大，從而說明KXRG主要作用于G1/S關卡，即細胞周期限制點，而對M期的限制點無作用。
　　 3.KXRG及其含藥血清對活化

5、的HSC超微結構的影響電鏡下正常HSC細胞胞膜完整，胞質細胞器結構清晰，核膜完整，核仁清晰，染色質均勻分布于胞核中；經KXRG預處理后，細胞體積縮小，胞膜表面凹凸不平，細胞質電子密度加深，細胞核收縮，核仁松散，并逐漸分散到細胞核膜周圍，并可見細胞內空泡形成。
　　 4.KXRG及其含藥血清對核仁非組蛋白B23、C23活性水平的影響Western blot的結果顯示KXRG可降低HSC核仁中B23、C23蛋白活性的表達，且隨藥物及

6、含藥血清濃度的增加而降低。
　　 結論：
　　 1、KXRG可以抑制活化的HSC增殖；阻滯其細胞周期的正常進行，使其滯留于G0/G1期；并對其超微結構有明顯影響。
　　 2、KXRG能降低HSC核仁非組蛋白B23、C23活性水平的表達。
　　 3、本研究結果提示：KXRG可能通過降低HSC核仁非組蛋白B23、C23活性水平的表達，調控細胞周期，抑制活化HSC的增殖，從而達到抗肝纖維化的作用，這可能是KXR