靈芪蠲肝膠囊含藥血清對(duì)活化的大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:觀察靈芪蠲肝膠囊含藥血清對(duì)血小板衍化生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor,PDGF)誘導(dǎo)的活化大鼠肝星狀細(xì)胞-T6(hepatic stellate cell-T6,HSC-T6)的凋亡的影響,并觀察其對(duì)bcl-2、bax、TIMP-1、MMP2和Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)的影響,探討其可能的抗肝纖維化機(jī)制。方法:1.制備含藥血清:SD大鼠30只,隨機(jī)分為3組,每組10只,分別用生理鹽水(A組,10ml/k

2、g),復(fù)方鱉甲軟肝片藥液(B組,1.5g/kg),靈芪蠲肝膠囊藥液(C組,4.25g/kg)灌胃7天,經(jīng)腹主動(dòng)脈采血,靜置、離心、滅活、過(guò)濾,取得含藥血清。2.以PDGF10ng/ml刺激HSC-T6活化。將各組含藥血清按200ml/L分別作用于HSC-T6,0、12、24、48h后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組HSC-T6凋亡情況以及bcl-2、bax的表達(dá),酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA法)檢測(cè)24h時(shí)各組上清液中Ⅰ、Ⅲ型膠原、TIMP-1、M

3、MP2濃度量表達(dá)。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:計(jì)量資料數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x±s)來(lái)表示。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件,分析各處理因素的主效應(yīng),采用析因設(shè)計(jì)方差分析交互效應(yīng),方差齊性檢驗(yàn)后對(duì)多組間的比較采用單因素方差分析,組間的兩兩比較采用S-N-K法或Dunnett法,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.對(duì)HSC-T6凋亡的影響:固定時(shí)間,各干預(yù)因素單獨(dú)效應(yīng)及多重比較顯示:12、24、48h,B、C組分別與A組比較,細(xì)胞凋亡率出現(xiàn)明顯

4、升高,有顯著性差異(P<0.05),而B(niǎo)、C兩組間的比較無(wú)明顯性差異(P>0.05)。固定分組,各時(shí)間因素單獨(dú)效應(yīng)及多重比較顯示:除A組外,B、C組在不同時(shí)間點(diǎn)的兩兩比較均有顯著差異,細(xì)胞凋亡率隨時(shí)間的延長(zhǎng)出現(xiàn)明顯上升。2.對(duì)bcl-2表達(dá)的影響:固定時(shí)間,各干預(yù)因素單獨(dú)效應(yīng)及多重比較顯示:12、24、48h,B組、C組分別與A組比較,bcl-2的表達(dá)均出現(xiàn)明顯下降,有顯著性差異(P<0.05),而B(niǎo)組與C組間的比較無(wú)明顯性差異(P>0

5、.05)。固定分組,各時(shí)間因素單獨(dú)效應(yīng)及多重比較顯示:除A組外,B組和C組在不同時(shí)間點(diǎn)的兩兩比較均有顯著差異,bcl-2的表達(dá)在0h表達(dá)最高,隨時(shí)間的延長(zhǎng)整體表現(xiàn)為下降趨勢(shì)。3.對(duì) bax表達(dá)的影響:固定時(shí)間,各干預(yù)因素單獨(dú)效應(yīng)及多重比較顯示:12、24、48h,B組、C組分別與A組比較,bax的表達(dá)均出現(xiàn)明顯上升,有顯著性差異(P<0.05),而B(niǎo)組與C組間的比較無(wú)明顯性差異(P>0.05)。固定分組,各時(shí)間因素單獨(dú)效應(yīng)及多重比較顯示

6、:除A組外,B組和C組在不同時(shí)間點(diǎn)的兩兩比較均有顯著差異,bax的表達(dá)隨著時(shí)間的延長(zhǎng),整體表現(xiàn)為上調(diào)趨勢(shì)。4.對(duì)TIMP-1、MMP2及Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)的影響:與 A組比較,B、C組TIMP-1、Ⅰ、Ⅲ型膠原均下降,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均 P<0.01);B、C組間 TIMP-1、Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。與A組比較,B、C組MMP2明顯增高,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.01);與B組比較,C組MMP2表達(dá)量高,但無(wú)統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論:1.靈芪蠲肝膠囊可以誘導(dǎo)活化的HSC-T6凋亡,且作用具有時(shí)間依賴(lài)性。其誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制可能為影響bcl-2/bax表達(dá)失衡;2.靈芪蠲肝膠囊能降低TIMP-1在活化的HSC-T6中的表達(dá),而促進(jìn)MMP2分泌。3.靈芪蠲肝膠囊能減少活化的HSC-T6分泌Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原?？傊狙芯勘砻黛`芪蠲肝膠囊可以通過(guò)影響bcl-2/bax表達(dá)失衡而介導(dǎo)活化的大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡,并且最終導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)分泌減少以及降解因