抗纖軟肝顆粒調(diào)控Hedgehog通路核轉(zhuǎn)錄因子Gli1抑制HSC活化的研究.pdf

1、目的：抗纖軟肝顆粒是湖北省中醫(yī)院院內(nèi)制劑，長期以來的臨床應(yīng)用顯示其減輕和延緩肝纖維化進(jìn)程療效顯著。本研究采用抗纖軟肝顆粒干預(yù)血小板衍生生長因子（PDGF）誘導(dǎo)活化的肝星狀細(xì)胞（HSC），并分析其對Hedgehog（Hh）信號通路核轉(zhuǎn)錄因子Gli1及該信號通路關(guān)鍵組分表達(dá)的影響，進(jìn)而探討抗纖軟肝顆粒調(diào)控Hh信號通路、抑制HSC活化的抗肝纖維化作用機(jī)制。
　　方法：引進(jìn)人肝星狀細(xì)胞系HSC-LX2，常規(guī)培養(yǎng)及傳代，設(shè)立空白對照組、模型

2、組和抗纖軟肝顆粒中、低劑量組。常規(guī)培養(yǎng)的HSC作為空白對照組；終濃度為10ng/ml的 PDGF-BB誘導(dǎo)HSC活化，建立模型組；誘導(dǎo)活化的HSC分別加入濃度為5mg/ml、1.25mg/ml的抗纖軟肝顆粒藥物溶液進(jìn)行干預(yù)（抗纖軟肝顆粒中、低劑量組）。藥物作用24小時后收集細(xì)胞，TRIzol法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA，實(shí)時熒光定量PCR法測定Hh信號通路相關(guān)信號分子Gli1、Shh、Ptc、Smo的表達(dá)，分析抗纖軟肝顆粒對

3、HSC活化、合成轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）及PDGF-B的影響。
　　結(jié)果：HSC經(jīng)PDGF-BB誘導(dǎo)后活化、細(xì)胞增殖。實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果顯示模型組HSC細(xì)胞Hh信號通路相關(guān)信號分子Shh、Ptc、Smo、Gli1 mRNA表達(dá)均增高，與空白對照組比較差異具有顯著性意義（P＜0.05）；抗纖軟肝顆粒中、低劑量組Gli1、Ptc、Smo mRNA表達(dá)較模型組減少，Shh mRNA表達(dá)較模型組增高，差異具有顯著性意義（P＜

4、0.05），各劑量組之間比較差異無顯著性意義。HSC誘導(dǎo)活化后，模型組TGF-β1及PDGF-B合成增加，與空白對照組比較差異具有顯著性意義（P＜0.05）；抗纖軟肝顆粒中、低劑量組TGF-β1及PDGF-B合成較模型組下降，差異具有顯著性意義（P＜0.05），各劑量組之間比較差異無顯著性意義。
　　結(jié)論：抗纖軟肝顆粒能夠調(diào)控Hh信號通路核轉(zhuǎn)錄因子Gli1及相關(guān)信號分子 Shh、Ptc、Smo的表達(dá)，從而抑制 HSC活化，減少 T