舒肝顆粒對大鼠肝星狀細(xì)胞α-SMA、TNF-α、TGF-β-,1-表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究舒肝顆粒針對肝纖維化防治作用的機(jī)制。為了探討舒肝顆粒對肝纖維化（HF）的逆轉(zhuǎn)是否有作用，我們采用舒肝顆粒作用于體外培養(yǎng)的大鼠肝星狀細(xì)胞（HSC），研究其對HSCα-平滑肌動蛋白（Smooth muscle actin，α-SMA）、腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（Transforming growth factor-β1，TGF-β1）表達(dá)的影響，以探討舒肝顆

2、粒對HSC增殖與活化的影響及相關(guān)機(jī)制，為舒肝顆粒臨床應(yīng)用提供進(jìn)一步理論依據(jù)。 方法：將肝星狀細(xì)胞培養(yǎng)于含10%特級胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基，37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)。采用MTT法測舒肝顆粒不同濃度組（0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.04mg/ml、0.08mg/ml）對細(xì)胞增殖情況的影響，根據(jù)結(jié)果將后續(xù)試驗(yàn)分組為空白對照組、舒肝顆粒0.01mg/ml組、舒肝顆粒0.02mg/ml組和肝顆粒0.04mg/m

3、l組，干預(yù)體外培養(yǎng)的HSC24小時后，鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)，用免疫組化法測定各組HSCα-SMA表達(dá)情況，用放射免疫法測定各組HSC TNF-α表達(dá)情況，用熒光定量PCR法測定各組HSC TGF-β1表達(dá)情況。 結(jié)果：1.舒肝顆粒四個濃度組的MTTOD值均低于空白對照組，0.01mg/ml與空白對照組之間HSC增殖差異無顯著性意義（P>0.05），其余各組與空白對照組之間HSC增殖差異有顯著性意義（P<0.05）。2.鏡下觀察四

4、組細(xì)胞：空白對照組HSC胞體扁平，伸展成膜狀，呈肌成纖維細(xì)胞的改變；舒肝顆粒0.01mg/ml組，胞體伸展稍被抑制，胞體呈星形；舒肝顆粒0.02mg/ml組，HSC細(xì)胞形態(tài)介于舒肝顆粒0.01mg/ml組與舒肝顆粒0.04mg/ml組之間；舒肝顆粒0.04mg/ml組，能明顯抑制細(xì)胞體伸展，胞體近梭形，類似于靜止期形態(tài)。各組均未見核固縮或凋亡現(xiàn)象。3.免疫組化法檢測各組α-SMA表達(dá)情況：α-SMA在各組均有表達(dá)，采用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)

5、免疫組織化學(xué)圖像分析軟件，所取參數(shù)為陽性細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)比率。陽性信號為棕黃色或棕褐色，位于細(xì)胞漿的線粒體膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上，陰性組織呈現(xiàn)藍(lán)色。同一蓋玻片，取200×高倍視野下α-SMA顯色攝取圖像，用細(xì)胞計(jì)數(shù)軟件作定量分析代表陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)比率?？瞻讓φ战M、舒肝顆粒0.01mg/ml組、舒肝顆粒0.02mg/ml組及舒肝顆粒0.04mg/ml組陽性表達(dá)率用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示分別為（62.83±3.42）%、（47.31±2.74）%、（37.79±

6、3.01）%、（25.74±2.83）%，各組與空白對照組相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。4.放射免疫法測各組TNF-α水平結(jié)果顯示：空白對照組、舒肝顆粒0.01mg/ml組、舒肝顆粒0.02mg/ml組和肝顆粒0.04mg/ml組TNF-α含量用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示分別為：（2.44±0.54）ng/ml、（2.13±0.35）ng/ml、（1.92±0.33）ng/ml和（1.37±0.35）ng/ml，空白對照組與舒肝顆粒0.

7、01mg/ml組兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），空白對照組與舒肝顆粒0.02mg/ml組、0.04mg/ml組組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。5.熒光定量PCR法測各組TGF-β1的表達(dá)情況：空白對照組、舒肝顆粒0.01mg/ml組、舒肝顆粒0.02mg/ml組及舒肝顆粒0.04mg/ml組TGF-β1表達(dá)水平通過計(jì)算2-△△Ct值用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示分別為：（1.00±0.09）、（0.71±0.08）、（0.55±0.