Annexin Ⅱ在肺鱗癌、腺癌的表達(dá)及意義.pdf

1、膜連蛋白Ⅱ(Annexin Ⅱ)屬于膜連蛋白家族中的一員，又被稱為Annexin A2、Calpactin重鏈、LipocortinⅡ、P36，是一類鈣依賴性磷脂結(jié)合蛋白，在許多的細(xì)胞功能中發(fā)揮作用，如細(xì)胞凋亡，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以及細(xì)胞的運(yùn)動能力。Annexin Ⅱ存在于內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞和一些腫瘤細(xì)胞中，其位于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜的胞質(zhì)面。它在增生和轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中高表達(dá)，在終末分化的細(xì)胞中低表達(dá)。近年來，研究發(fā)現(xiàn)annexinⅡ在

2、胃癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、肝細(xì)胞肝癌、胰腺導(dǎo)管腺癌等腫瘤中異常表達(dá)，與腫瘤的侵潤轉(zhuǎn)移或預(yù)后相關(guān)。目前，關(guān)于肺鱗癌、腺癌中annexin Ⅱ的表達(dá)與腫瘤的惡性程度及侵襲轉(zhuǎn)移能力均不清楚。本研究通過檢測肺鱗癌、腺癌及癌旁肺組織中AnnexinⅡ的表達(dá)情況，分析其與臨床病理因素的關(guān)系，探討AnnexinⅡ在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。并通過檢測不同侵襲能力肺癌細(xì)胞系A(chǔ)nnexin Ⅱ蛋白表達(dá)水平，提示annexinⅡ在肺癌細(xì)胞中表達(dá)的差異可能與肺癌細(xì)

3、胞的體外侵襲能力相關(guān)。 材料與方法 1、免疫組織化學(xué) S-P法檢測120例肺鱗癌、腺癌組織標(biāo)本，標(biāo)本來自中國醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2000～2006年外科手術(shù)切除之原發(fā)性肺癌組織，所有患者術(shù)前均未接受過任何系統(tǒng)的放療或化療。 標(biāo)本用中性福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，制成4μm切片，經(jīng)脫蠟、脫苯、水化后采用鏈菌素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化法(S-P法)檢測Annexin Ⅱ蛋白(1：200)表達(dá)，以PBS

4、代替一抗作為陰性對照。結(jié)果判定：Annexin Ⅱ以腫瘤細(xì)胞胞膜及胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)，以染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)比例評定陽性表達(dá)。光鏡下每張切片選取癌細(xì)胞較多的5個高倍視野，每個視野計數(shù)100個細(xì)胞。著色強(qiáng)度分級為：無色(-)為0分、淺黃色(+)為1分、黃色及更深顏色(++)為2分．陽性細(xì)胞數(shù)分級為：≤50％為0分、51％-75％為1分、>75％為2分。兩項得分相乘結(jié)果≥2分為陽性病例。 2、Westem Blot

5、 采用40例新鮮肺鱗癌、腺癌及癌旁正常肺組織標(biāo)本，均來自中國醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2006年5月-2007年7月行外科手術(shù)切除的肺癌患者標(biāo)本。人正常支氣管上皮細(xì)胞系HBE及人肺癌細(xì)胞系BE1、LH7、A549、A2為本實驗室凍存。提取組織與細(xì)胞蛋白，采用考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行蛋白定量。取等量蛋白，進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳和轉(zhuǎn)印，一抗(anti-annexin，Ⅱ 1：200稀釋，anti-β-actin1：500稀釋)和辣根過氧化物酶標(biāo)

6、記二抗(1：3000及1：2000稀釋)孵育，DAB顯色。以β-aetin為內(nèi)對照，結(jié)果判定為PVDF膜上出現(xiàn)灰色條帶，并對條帶進(jìn)行灰度值測定。 3、統(tǒng)計分析 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果: 1、Annexin Ⅱ在肺鱗癌、腺癌和癌旁正常肺組織中的表達(dá) 40例新鮮肺鱗癌、腺癌組織及相應(yīng)癌旁正常肺組織進(jìn)行Western Blot分析，結(jié)果顯示：Annexi

7、n Ⅱ在肺鱗癌、腺癌和癌旁組織中均有表達(dá)，分子量約為36KDa，在癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁正常肺組織(P=0.02)。 免疫組織化學(xué)S-P法檢測120例肺鱗癌、腺癌組織中Annexin Ⅱ的定位和表達(dá)情況。結(jié)果顯示：120例肺癌組織中，79例(65.8％)肺癌組織的癌細(xì)胞胞膜及胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒。 2、Annexin Ⅱ蛋白在肺癌細(xì)胞系中的表達(dá) Annexin Ⅱ在四種肺癌細(xì)胞系及人支氣管上皮細(xì)胞系均有表達(dá)，

8、但肺癌細(xì)胞系中蛋白的表達(dá)量高于人正常支氣管上皮細(xì)胞；高侵襲能力肺巨細(xì)胞癌細(xì)胞BElannexin Ⅱ的蛋白表達(dá)量明顯高于低侵襲能力肺巨細(xì)胞癌細(xì)胞LH7。 3、Annexin Ⅱ的表達(dá)與肺鱗癌、腺癌臨床病理特征間的關(guān)系 對120例肺鱗癌、腺癌組織中annexin Ⅱ的表達(dá)情況進(jìn)行X2檢驗、統(tǒng)計學(xué)分析，結(jié)果顯示：Annexin Ⅱ的表達(dá)與分化程度(p=0.000)，臨床分期(p=0.021)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(p=0.030)有關(guān)