局部低溫對(duì)大鼠脊髓體感誘發(fā)電位的影響及其安全性研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　 脊髓損傷是指由于各種原因造成脊髓運(yùn)動(dòng)、感覺和（或）自主神經(jīng)功能暫時(shí)性或永久性的減退或喪失，是外傷患者主要的死亡和致殘?jiān)蛑弧＜顾钃p傷在給患者自身的生活質(zhì)量造成極大影響的同時(shí)，也嚴(yán)重阻礙了社會(huì)的進(jìn)步及發(fā)展，并給醫(yī)療衛(wèi)生系統(tǒng)帶來(lái)了極大壓力。
　　 目前，治療脊髓損傷主要依賴外科手術(shù)及藥物治療，包括糖皮質(zhì)激素、神經(jīng)節(jié)甘脂以及興奮性氨基酸拮抗劑等。雖然不時(shí)有報(bào)道證明各類藥物在實(shí)驗(yàn)室水平具有神經(jīng)保護(hù)和促進(jìn)

2、神經(jīng)功能恢復(fù)的作用，但是臨床層面的實(shí)用價(jià)值和療效仍缺乏權(quán)威性的支持，且患者的遠(yuǎn)期恢復(fù)情況較前并未出現(xiàn)明顯改善。低溫作為一種物理性干預(yù)手段，其治療作用早在上世紀(jì)中期就已被學(xué)者所證實(shí)，雖然全身低溫技術(shù)在脊髓損傷后的神經(jīng)保護(hù)作用已被眾多研究所證明。但其容易導(dǎo)致核心溫度過(guò)低，進(jìn)而引起心律失常，呼吸、泌尿系統(tǒng)感染以及出血傾向等致命性并發(fā)癥的缺點(diǎn)逐漸暴露，并限制了其在臨床的進(jìn)一步應(yīng)用。為此有學(xué)者提出用局部低溫代替全身低溫，以降低并發(fā)癥的發(fā)生率。雖然

3、目前已有報(bào)道將局部低溫應(yīng)用于體外循環(huán)術(shù)中以減輕或避免脊髓出現(xiàn)缺血性損傷的報(bào)道，但是針對(duì)脊髓損傷的研究及應(yīng)用卻鮮見，一方面原因在于相關(guān)技術(shù)的不成熟，更主要的尚沒有任何文獻(xiàn)對(duì)局部低溫的安全性缺乏全面的論證。體感誘發(fā)電位對(duì)損傷刺激反應(yīng)敏感，其監(jiān)測(cè)結(jié)果不僅能反應(yīng)脊髓后柱的情況，更能全面了解脊髓的整體功能。但體感誘發(fā)電位容易受外界環(huán)境干擾，其中對(duì)溫度最為敏感，輕微的溫度波動(dòng)即可導(dǎo)致體感誘發(fā)電位波形發(fā)生變化。
　　 本研究即以脊髓體感誘發(fā)電

4、位為主要監(jiān)測(cè)指標(biāo)，通過(guò)觀察體感誘發(fā)電位在不同局部溫度下的變化情況，同時(shí)結(jié)合組織學(xué)及行為學(xué)評(píng)價(jià)，討論局部低溫的神經(jīng)安全性問(wèn)題。以此為局部低溫領(lǐng)域?qū)?lái)的研究奠定安全性方面的支持。
　　 研究方法及結(jié)果：
　　 一、大鼠局部硬膜外低溫動(dòng)態(tài)干預(yù)模型的構(gòu)建
　　 以體重在200-220g的SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，使用10％水合氯醛(3.5ml/kg)進(jìn)行腹腔麻醉后以T10作為目標(biāo)節(jié)段實(shí)施單節(jié)段椎板咬除術(shù)，注意保持硬脊膜的完整

5、并保證脊髓不受到損傷。置入微型溫度探頭并使其緊貼但不壓迫硬脊膜;另兩枚溫度探頭分別監(jiān)測(cè)肛溫和室溫。兩條低溫液引流管分別從兩旁固定于T10水平的椎旁肌上形成液體對(duì)流模型，其中一條引流管外接4℃生理鹽水。成功置管后用4-0手術(shù)縫線緊密肌肉。通過(guò)隨機(jī)選取不同的溫度值，檢測(cè)模型的可行性與準(zhǔn)確性。
　　 二、不同程度局部低溫對(duì)體感誘發(fā)電位的影響
　　 按第一部分實(shí)驗(yàn)的方法建立局部低溫干預(yù)模型，將一對(duì)針型記錄電極分別插入T7-T8，

6、T8-T9的棘突韌帶;將另一對(duì)電極分別置于兩眉弓連線中點(diǎn)及兩耳根連線中點(diǎn)，作為FPZ和CZ點(diǎn);兩對(duì)刺激電極分別刺入雙后肢肌肉;參考電極置于皮下。在記錄初始誘發(fā)電位后，通過(guò)調(diào)整4℃生理鹽水的流速，使局部硬膜外溫度在5min之內(nèi)分別降至30℃、26℃、22℃及18℃，并在各溫度水平上保持30min后記錄雙后肢體感誘發(fā)電位。隨后停止灌注開始自然復(fù)溫，待溫度穩(wěn)定后再次描記復(fù)溫后電位情況。
　　 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)體感誘發(fā)電位的N1-P2振幅在

7、各個(gè)低溫點(diǎn)均出現(xiàn)明顯壓低(P＜0.01)，而N1-P2潛伏期在30℃-22℃之間的各溫度點(diǎn)上未見明顯變化(P＞0.05)，僅在18℃時(shí)出現(xiàn)顯著延長(zhǎng)(P＜0.05)。潛伏期和振幅在復(fù)溫后均恢復(fù)至降溫前水平(P＞0.05)。
　　 三、局部低溫的神經(jīng)安全性研究
　　 （一）后肢運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分實(shí)驗(yàn)大鼠分別在術(shù)前、麻醉徹底清醒后及術(shù)后第1、7、14天使用BBB后肢運(yùn)動(dòng)評(píng)分表進(jìn)行盲法評(píng)分。
　　 （二）H&E染色及Fluor

8、o-Jade C染色分析術(shù)后第1、7、14天分別進(jìn)行常規(guī)灌注及4％多聚甲醛灌注固定，取出干預(yù)節(jié)段(T10)及其上、下各一個(gè)節(jié)段（T9和T11）共3部分脊髓作為標(biāo)本，行冰凍切片后分別進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)HE染色，并在顯微鏡下觀察脊髓組織形態(tài)。同時(shí)進(jìn)行Fluoro-JadeC染色觀察灰、白質(zhì)內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞死亡情況，并在熒光顯微鏡下對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)。
　　 結(jié)果顯示，所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在各時(shí)間點(diǎn)上評(píng)分均為21分。H&E染色未見明顯神經(jīng)元細(xì)胞變性、壞死

9、，無(wú)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，脊髓組織完整性好;Fluoro-Jade C熒光染色無(wú)明顯陽(yáng)性細(xì)胞，與非干預(yù)節(jié)段比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 本研究成功建立了大鼠脊髓局部硬膜外動(dòng)態(tài)低溫模型。該模型借助微探針溫度監(jiān)測(cè)儀，通過(guò)調(diào)節(jié)低溫液體流速實(shí)現(xiàn)脊髓局部硬膜外的連續(xù)變溫。本研究還在該模型基礎(chǔ)上進(jìn)一步完成了對(duì)同一實(shí)驗(yàn)個(gè)體在不同的局部溫度下體感誘發(fā)電位的反復(fù)記錄。
　　 本課題主要論證了局部低溫可抑制正